Question

根据A260/A280值如何判断DNA溶液的浓度

Answer 1

根据A260/A280值判断DNA溶液的浓度：

根据数据，当样品DNA的A260/A280为1.8-2.0时，认为已达到所要求的纯度。在样品中含有蛋白质或苯酚等杂质时，会使A260/A280的比值发生改变。如果A260/A280<1.7,说明蛋白质没有除干净。如果A260/A280>2，说明RNA没有除干净或DNA已变性。

原理

蛋白中trp、tyr、phe的吸光度为280nm，所以280nm常用来表示蛋白质吸光度；而260nm为DNA的吸光度。

样品中如果含有蛋白质及苯酚，A260/A280比值会明显下降。对于纯的样品只要读出260 nm 的A值即可以算出含量。通常以A值为1相当于50微克/ml 双螺旋DNA，或者40微克/ml 单链DNA（RNA），或者20微克/ml 寡核苷酸计算。