Question

质粒双酶切的后目的片段怎么变大了

Answer 1

首先从基因序列着手检查酶切位点是否正确；检查酶切实验，确认反应条件、缓冲溶液使用正确，不存在非特异性切割。
前提是确定双酶切后载体骨架片段大小正确，条带亮度基本符合比例。
分析载体与基因片段上的某处是否有共同酶切位点，再通过载体上的通用引物对重组质粒进行PCR验证。
可以用两种酶对重组质粒和空载体分别做两组单酶切，哪一组结果与理论不一致，哪一组的酶就有问题，如果都没有问题那么很有可能是双酶切反应体系存在问题。
最后不排除琼脂糖凝胶电泳存在分子量大小的误差，视琼脂糖凝胶电泳结果图片而定。
有问题可以追问，欢迎交流。