Question

水中粪大肠菌群的测定

1，污水处理厂出水检测
2，因暂无国标，方法根据水和废水监测分析方法第四版
3，采用多管发酵法

问题是：
1，各种管的规格。在那个方法中提到的：分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，以及分装于含有玻璃倒管的试管中，这是什么意思？试管是什么规格？小玻璃管是什么规格？导管是什么规格？各需要多少支？
2，培养基中提到的EC培养液，乳糖蛋白胨培养液,这些是要按配方中讲到的各种试剂配置，还是有现成的买？比如乳糖胆盐培养基。
3，试管要不要加塞子？用什么塞子？硅胶塞吗？
4，其它所需要的仪器设备有哪些

希望有经验的朋友和老师为我解答，重分悬赏，另，本人喜欢你按照题问来一一解答，而不是在某处粘一大篇所谓某某资料，资料我找了很久，找了很多，谢谢！
第四条请尽量详细，就是一般城镇污水处理厂需要检测哪些项目，需要哪些仪器来做这些项目，请有经验之老师详解。

Answer 1

粪大肠菌群的测定
1 卫生学意义
粪大肠菌群测定的卫生学意义：一、与大肠菌群相比，粪大肠菌群在人和动物粪便中所占的比例较大，而且在自然界容易死亡。因此，粪大肠菌群的存在表明食品近期内可能直接或间接的受到了粪便的污染；二、作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性；三、常用做贝类和贝类养殖用水的卫生指标 。
2 检验方法
2.1 术语与定义
一群在44.5℃培养24h-48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
卫生学概念，又称为耐热大肠菌群，主要是大肠杆菌，但也包括克雷伯氏菌属等。
2.2 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
（1）恒温培养箱：36℃±1℃。
（2）冰箱：2℃～5℃。
（3）恒温水浴箱：46℃±1℃。
（4）天平：感量0.1g。
（5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。
（6）无菌锥形瓶：容量500mL。
（7）无菌培养皿：直径90mm。
（8）pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。
2.3 培养基和试剂
（1）月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：
1）成分：胰蛋白胨或胰酪胨：20.0g；氯化钠：5.0g；乳糖：5.0g；磷酸氢二钾（K2HPO4）：2.75g；磷酸二氢钾（KH2PO4）：2.75g；月桂基硫酸钠：0.1g；
蒸馏水：1000mL；pH：6.8±0.2
2）制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。121 ℃高压灭菌15 min。
（2）EC肉汤（E.coli，BGLB）：
1）成分：胰蛋白胨或胰酪胨：20.0 g；3号胆盐或混合胆盐：1.5 g；乳糖：5.0g；磷酸氢二钾（K2HPO4）：4.0g；磷酸二氢钾（KH2PO4）：1.5g；氯化钠：5.0g；
蒸馏水：1000mL；pH：6.9±0.1。
2）制法：将上述成分溶于约蒸馏水中，调节pH，分装到有玻璃小导管的试管中，每管8mL，121℃高温灭菌15min。
（3）无菌生理盐水：
1）成分：氯化钠：8.5 g；蒸馏水：1000mL；
2）制法：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
2.4 检验程序
2.5 操作步骤
（1）初发酵
选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液。每个稀释度接种三管月桂基磺酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量需要超过1mL，则用双料LST肉汤）。36℃±1℃培养24h±2h，检查倒管内是否有气泡产生或轻摇试管时是否有密集连续的细小气泡从管底逸出，如未产气则继续培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为粪大肠菌群阴性；对产气者，则进行复发酵试验。
（2）复发酵
用接种环从所有48h±2h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于已提前预温至45℃的EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管放入于带盖的44.5℃±0.2℃恒温水浴箱内，水浴的水面应高于肉汤培养基液面，培养24h±2h，记录EC肉汤管的产气情况。产气管为粪大肠菌群阳性，不产气为粪大肠菌群阴性。
注：EC肉汤管在接种之前要提前预温至45℃，因为这个温度是选择性生长的条件之一，如果不提前预温，那些能够在44.5度以下生长的非粪大肠菌群类细菌在培养基的升温阶段就可能已经生长并发酵乳糖产气了。
2.6 结果与报告
证实为粪大肠菌群的阳性管数,
群MPN值。
查(MPN)表, 报告每g（mL）样品中粪大肠菌。

Answer 2

1.管的规划不定，最好是带盖子的10－50ml的玻璃管，一般要最少做5个平行。
2.培养基都可以自己配的，建议用简单的LB培养基即可，药品为蛋白胨和NaCl（固体用agar）。
3.塞子或盖子都可以，但一定要加。
4.需要超净台、高压灭菌锅、调温摇床这些必备仪器。

粪大肠菌群是生长于人和温血动物肠道中的一组肠道细菌，随粪便排出体外，约占粪便干重的1／3以上，故称为粪大肠菌群。粪大肠菌群不是细菌学上分类命名，而是根据卫生学方面的需要，而设定的一类与粪便污染有关的一组细菌，是能在44.5℃24h内发酵乳糖产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。粪大肠菌群为一群需氧及兼性厌氧的菌群，呈革兰氏阴性反应，能在普通培养基上生长繁殖；其生化活动能力较强，能发酵多种糖类，产酸产气，其特点是能较快发酵乳糖，粪大肠菌群在乳糖培养基中于．37℃下进行培养，在24h内能使乳糖发酵产酸，还有甲酸解氢酶进行分解甲酸，生成氢气和二氧化碳，产生大量气体，这时，若加入伊红美兰指示剂，分解乳糖所产生的酸(带阳电荷)与伊红相染呈紫色且有金属光泽，故常用此特性来鉴定识别粪大肠菌群。
具体操作如下：

(1)发酵(产酸产气)试验 将试样液以无菌接种于双倍乳糖胆盐发酵管(其内放有倒置的小玻璃管，以收集气体)内，置44'E培养箱中培养24—48h，由于乳糖胆盐培养基是一种具有选择作用的培养基，其中胆盐具有抑制革兰氏阳性菌的作用，若观察到发酵管内不产酸(有酚红指示剂指示)不产气，则报告试样为粪大肠菌群阴性，未检出，检测结束。
若发酵管内产酸产气，则继续进行下列检测。
(2)鉴别培养 将有产酸产气的发酵管内试样培养液接种到伊红美兰琼脂培养基平皿上，置37℃培养18～24h；同时将该培养液接种到蛋白胨水中，置44℃培养24h。
(3)验证实验 菌落观察：在上述平皿培养基上，仔细观察菌落生长情况：大肠菌群在伊红美兰琼脂培养基上其典型菌落是呈深紫色、圆形、边缘整齐、表面光滑、湿润、常具有金属光泽，或呈紫黑色不带或略带金属光泽及粉紫色，中心较深的菌落。
革兰氏染色、镜检：将以上典型的(或近似的)大肠菌群菌落进行革兰氏染色、镜检，若革兰氏染色呈阳性(紫色)反应，则报告粪大肠菌群呈阴性，未检出。若革兰氏染色呈阴性，检测还需进行下一试验，以待进一步证实。
靛基质试验(吲哚试验)：对前已培养好的蛋白胨水中，滴人靛基质试剂(对二甲基氨基苯甲醛试剂)，进行靛基质反应，若液面呈玫瑰红色，呈阳性反应，则报告粪大肠菌群呈阳性，检出；若液面仍是棕黄色，则报告粪大肠菌群呈阴性，未检出。
(4)检测程序 将上述检测粪大肠菌群的操作步骤可归结为以下程序图示。
(5)检验报告 当发酵管内产酸产气，观察试液平皿上为典型粪大肠菌群菌落，并经革兰氏染色、检镜试验为阴性(—)及靛基质试验为阳性，则报告该试液经检测检出粪大肠菌群。其他结果均为未检出粪大肠菌群。

Answer 3

1.楼上回答正确，用来测发酵产生气体量，一般大试管20cm，小试管5cm；可根据需要设几组对比实验；
2.EC培养液一般是买试剂自行配置，乳糖蛋白胨一般是有蛋白粉买的。除了蛋白胨之外，好像基本上都是买试剂了自行配置的；
3.楼上回答正确，这塞子是防尘，透气用的；
4.其它所需要的仪器有还要有各种COD、氨-氮测量试剂和仪器，分光光度计，有条件的话，最好弄台气相色谱或者液相色谱，这样分析更精确。
如果条件不够的话，可以与附近有开设相关专业的学校合作，让他们代为分析，或者借用仪器进行化验。

Answer 4

我并非专业检测人员,但这几个问题我也许可以试试看
1、关于试管，是把小试管倒置放置在大试管里，这样可以检验出细菌是否发酵产生气体。规格，大试管直径是2cm，小试管是0.5cm，这个不准。。。数量，看你的样本数了要
2、通过基本的原料可以配制培养基，应该也能直接买，不过自己配似乎便宜一些
3、要加塞，可以用棉花和纱布制成塞子
4、如果是大肠杆菌的话，还要细菌接种和培养的一套设备，接种环，培养箱，等等
如果是其他项目，恩，检测电导、含氧量等物理数据可以有现成的仪器，用一个复合式的检测仪就很方便了；其他的可能有cod、bod、P等，这些都有相应的国标方案，方案有好几种，可以根据实验室条件进行选择。

我并没有很多实践经验，这些的话。。。。至少在原理上可行吧。。。