pcr退火温度怎么确定?
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计算退火温度的方法：
1.
退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）
只是粗算，有时不灵，但比较简便。
2.用primer5（or
oligo6）计算，引物配对好后，primer5可以显示Tm，我认为这个值就是退火温度，我的经验再加2
or
3度最好。
3.合成引物的单子上也有个Tm，减去5～8也可，但有些公司提供的Tm就是方法1计算的。
我认为方法二最准确，不知道还有其他方法吗？
1.
退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）
只是粗算，有时不灵，但比较简便。
2.用primer5（or
oligo6）计算，引物配对好后，primer5可以显示Tm，我认为这个值就是退火温度，我的经验再加2
or
3度最好。
3.合成引物的单子上也有个Tm，减去5～8也可，但有些公司提供的Tm就是方法1计算的。
我认为方法二最准确，不知道还有其他方法吗？
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11
2024-08-28 广告
会。不只造成假阳性，还有无序扩增等。 退火温度过低时，溶液中分子运动缓慢，引物与dna结合不需要高能量的化学键，即，引物可与非特定靶位点结合，并依靠氢键等弱化学键即可保持稳定并引起dna扩增。因此会产生非目的dna条带。有些非目的dna条带...
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