Question

16SrRNA鉴定菌株的方法！求详细步骤！

包括提DNA步骤、PCR扩增条件等！越详细越好！答的详细有分数追加！谢谢各位了~

Answer 1

我觉得不应该越详细越好，应该给你大体步骤，然后细节你自己找，查阅文献也是一种能力的培养，而且这种文献到处都是

一、提取其DNA，利用16SrRNA通用引物PCR扩增出其16SrRNA，取出一半进行跑胶测试纯度与大小，一般是1500bp左右，以下称之为目的基因

二、如果第一步得到的目的基因理想，就将目的基因连接到T载体上，T载体有很多种，随便哪种都可以，如果一种连接不上就换另一种，应该注意记得所用T载体的分子量大小，一般3000bp左右

三、连接后将整个连接体导入大肠杆菌细胞感受态细胞（很多实验书上都有具体步骤）

四、培养感受态细胞16或18小时，提取其质粒，然后将质粒拿出一部分跑胶，看提取情况并看一下分子量是否为16SrRNA和T载体的分子量之和，如果是，则成功

五、酶切所提取的质粒，以得到目的基因，跑胶，如果有目的基因大小的明亮条带则说明是16SrRNA，拿去测序就可以了

Answer 2

这个似乎不是太好说吧。根据你的目的，有不同的实验设计。

1.首先你去查阅相关的文献找到你所要鉴定的菌种在16srRNA的哪些片段或位点上与其他的菌种不一样。并且把这些片段或包含特异位点的片段拿到NCBI上去BLAST一下，从而筛选出有效的鉴定片段和位点。

2.如果你只需要鉴定少数几次，那么采用测序的方法比较方便，直接提取出细菌的DNA，拿到测序服务公司去测一下序列，已经非常清楚能够帮你鉴定该菌种是啥菌种了。

3，如果你是要做大规模的检测，测序相对来说费用会比较高，你可以开发一些试剂盒，或者基因芯片来检测。

4。大规模检测的时候究竟采用什么具体的方法需要具体情况权衡，包括制作芯片的价格及你的预算。开发试剂盒究竟用什么方法这些都是根据你的具体项目，然后参阅文献，需要你自己去设计的方案，没有一层不变的操作方法。所以没有办法详细说明。