PCR扩出来的条带亮度很弱是什么原因
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1. 模板的用量在你这种情况下应该和目的条带浓度关系不大——记得realtimePCR的原理图么，循环数够多时，目的片段的终浓度在不同模板量条件下相差不大；
2.首先考虑扩增效率问题，可用touch down PCR，除开头几个循环外，后面的退火温度降低一些，可提高扩增效率；
3.如果无效，建议使用两步法，95度 1min，（60-65）度 3min，可加入touch down 步骤；
4.不知道反应体系如何配置，应该是使用了GCbuffer吧？TaKaRa的GCbuffer（尤其是II）的确会降低一些扩增效率；
5.视你最终需要，如果是诊断目的，可多加一些Taq酶，也能增加扩增效率，但错配率和非特异扩增可能会增加。如果是克隆目的，其实目的条带暗一些很多时候并不影响最终实验结果。
（转载，仅供参考）
2.首先考虑扩增效率问题，可用touch down PCR，除开头几个循环外，后面的退火温度降低一些，可提高扩增效率；
3.如果无效，建议使用两步法，95度 1min，（60-65）度 3min，可加入touch down 步骤；
4.不知道反应体系如何配置，应该是使用了GCbuffer吧？TaKaRa的GCbuffer（尤其是II）的确会降低一些扩增效率；
5.视你最终需要，如果是诊断目的，可多加一些Taq酶，也能增加扩增效率，但错配率和非特异扩增可能会增加。如果是克隆目的，其实目的条带暗一些很多时候并不影响最终实验结果。
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2020-07-03 广告
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