电泳时为什么加入DNAmaker
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PCR实验本身中不需要加入marker,但是在PCR过后跑电泳的时候需要加入marker.用来对比PCR产物的大小,看看产物的电泳条带是不是符合你的预期的。
PCR中加marker的原因:
marker是人为的把一系列已知大小的DNA(或已知质量的蛋白,当然PCR中用的是DNA
marker不是蛋白marker)混合在一起,在电泳的时候对照用.跑完电泳之后,会看到marker的有几条清楚的条带,而每条的大小都是可以在这个marker的说明书上查到的.所以,条带对照,就大体知道你需要的条带的大小范围了。
PCR:
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。
marker:
标记(Marker),染色体上一个可以被识别的区域(比如限制性内切酶的酶切点,基因的位置等)。标记的遗传能够被检测出来。标记可以是染色体上有表达功能的部分(比如基因),也可以是没有编码蛋白质功能但遗传特性能够被检测出来的部分。
PCR中加marker的原因:
marker是人为的把一系列已知大小的DNA(或已知质量的蛋白,当然PCR中用的是DNA
marker不是蛋白marker)混合在一起,在电泳的时候对照用.跑完电泳之后,会看到marker的有几条清楚的条带,而每条的大小都是可以在这个marker的说明书上查到的.所以,条带对照,就大体知道你需要的条带的大小范围了。
PCR:
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。
marker:
标记(Marker),染色体上一个可以被识别的区域(比如限制性内切酶的酶切点,基因的位置等)。标记的遗传能够被检测出来。标记可以是染色体上有表达功能的部分(比如基因),也可以是没有编码蛋白质功能但遗传特性能够被检测出来的部分。
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