Question

小量一次提取质粒DNA的原理是什么？

Answer 1

小量提取质粒DNA的原理主要包括:1. 裂解细胞和核糖体,释放出质粒DNA。常用SDS和蛋白酶K破坏细胞结构,裂解细胞和核糖体,释放出各种DNA,包括质粒DNA、宿主染色体DNA等。2.去蛋白。添加洗脱液如酚/氯仿等有机溶剂,可以去除相关蛋白质,留下DNA。3.沉淀DNA。加入苏木素和异丙醇,可以使DNA选择性沉淀,此时质粒DNA和宿主DNA会同时沉淀。4.选择性吸附。使用硅柱等吸附质粒DNA,洗脱掉宿主DNA。硅柱对质粒DNA和宿主DNA有不同的亲和力,可以选择性吸附质粒DNA,洗脱宿主DNA。5.洗脱和浓缩DNA。用TE缓冲液等缓冲液洗脱硅柱,收集质粒DNA。可选用离心浓缩,得到小体积的质粒DNA溶液。6.可选的 PCR扩增。如果所得 DNA 浓度不够,可以使用 PCR 扩增获得更高浓度的质粒 DNA。所以,该方法通过裂解细胞,去蛋白,选择性沉淀和吸附等原理,实现了小量质粒DNA的提取,并通过 PCR达到了较高浓度,这就是小量提取质粒DNA的原理。