Question

琼脂糖凝胶电泳EB是加在胶中，为什么只有在有DNA的地方有荧光呢？

是不是在跑的过程中DNA可以富集胶内的EB？
另外为什么EB会致癌呢？加过EB的凝胶没用完，下次用加热后还用加EB么？EB加热后会不会挥发或者分解呢？谢谢？
你说的compare to heating the gel with and without EB。是什么意思？我不是太懂，是不是一块加EB，一块不加？可短时间内加热并不能说明加了EB的没有分解或者挥发啊？另外你说的痕量的挥发量会不会对人体造成伤害呢？谢谢！

Answer 1

EB即溴化乙锭，溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后，其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近，导致与DNA结合的染料呈现荧光，其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料，而被结合的染料本身吸收302nm和366nm的光辐射。这两种情况下，被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍，所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭（0.5ug/ml）时，可以检测到少至10ng的DNA条带。
所以，可以看出EB的强诱变性，可以导致原癌因子突变。
EB对微波和热是比较稳定的，实验室中用过的胶反复加热仍可显色。不过，尽量少用微波加热含EB的胶，且注意加热时温度的控制，温度不能太高。EB易挥发，加热容易使污染扩散。
所以一般实验配制时等胶稍凉再加EB，你说的compare to heating the gel with and without EB应该也是这个意思。一般来说， EB这种东西是需要长期接触才会致癌的。
如果你要处理含EB的溶液可以参考链接。

Answer 2

第一个不清楚，据一个师兄说EB的涌动方向和DNA相反，如果跑得时间太长而导致EB和DNA重叠部分消失，就看不到条带，只有黑糊糊一片。
EB插入DNA中，当然也能进入人体，插入人DNA中，引发原癌基因激活，就和化学诱变剂一样。
一定要加EB，因为你加热的时候原来的EB挥发了，所以必须降到60左右再加EB。

Answer 3

Ethidium bromide is an intercalating agent, when exposed to ultraviolet light, it will fluoresce with an orange colour. When DNA is moving in the gel, it binds EB during its moving. Therefore, DNA band has more fluoresce than the background.

1.to your question, "是不是在跑的过程中DNA可以富集胶内的EB", the answer is yes.
2.EB is thought to act as a mutagen because it intercalates double stranded DNA, thereby deforming the molecule.This can affect DNA biological processes, like DNA replication and transcription. So, EB会致癌.
3. You do not have to add more EB when you re-melt EB-containing gel.
4. When you heat the EB-containing gel, very trace EB could come to the air together with water vapor. You can compare to heating the gel with and without EB, you can tell.

Answer 4

DNA发光与EB无关，EB仅起导电作用，发光是由于在制备DNA样本时加入了荧光剂，所以在紫外光作用下，附在DNA上的荧光物质就会发出光来。

Answer 5

因为EB可以嵌入DNA分子中，在紫外照射下显橘红色。加热过的胶最好不要用了，那样的话污染的地方太多了，而且效果也不好。