Question

如何理解样品制备过程中蛋白质分离，提取和纯化?

蛋白质样品的制备有哪些过程？各个过程的意义是什么？
1.为什么蛋白质能进行电泳？
2.蛋白质电泳由一向电泳发展为双向电泳，应用了蛋白质的那些特性？
3.常规聚丙烯凝胶电泳的基本原理？SDS的作用是什么？

Answer 1

是根据蛋白质的理化性质将蛋白从组织或细胞中分离出来获得纯度较高的蛋白
提取就是将蛋白从组织里采用一定的方法分离出来；一般植物组织或是动物组织中都有脂肪，核酸等物质，提取液中含有大量杂质，分离即是将蛋白与这些杂质分离开；纯化是为了将分离过程中残留的那部分杂质去除，进一步提高蛋白纯度。

1、这个你有必要去了解下电泳的原理，事实上，胶体具有电泳现象，而蛋白能是一种生物大分子，能够配成胶体溶液。电泳时，通过一定手段（加热等）使蛋白质带上电荷，那样在电场中能够定向移动。而蛋白质所带电荷，蛋白质分子量的大小以及结构等会影响迁移的速率
2、双向电泳分离技术利用复杂蛋白混合物中单个组分的电泳迁移，第一向通过电荷的不同分离，另一向通过质量的不同分离。
3、原理：用聚丙烯酰胺为支持基质的电泳程序。一般说来，实现聚丙烯酰胺凝胶电泳有两种类型。(1)单向电泳：采用完整的蛋白质或用十二烷基磺酸钠(SDS)处理的蛋白质的单向泳动，在有凝胶的平板上平行分离(过去也有用在玻管中的圆筒形棒状凝胶进行电泳的，现已很少有人使用)。(2)双向电泳：首先用天然蛋白质进行分离，然后凝胶平板再用SDS处理，样品便在第二向得到分离。第一次分离了各种各样的蛋白质，因此第二向分离的是蛋白质亚基

SDS是一种阴离子去垢剂，可与蛋白质结合，形成SDS-蛋白质复合物。􀂙由于SDS带有大量负电荷，好比蛋白质穿上带负电的“外衣”，蛋白质本身带有的电荷则被掩盖,即消除了蛋白质分子之间电荷差异。􀂙因此在电泳时，蛋白质分子的迁移速度则主要取决于蛋白质分子大

Answer 2

蛋白质样品的制备主要包括分离和纯化两大步骤。前者是从生物体中提取出蛋白质，后者是提纯某一种目标蛋白。

1 蛋白质带有电荷，是两性分子，因此能够在电场中运动，因此能够电泳。

2 双向电泳中的第一向（等电聚焦）利用了蛋白质在不同pH值下带有不同的电荷，从而可以在等电聚焦中停止在蛋白分子不带电的pH值带上。而第二项(SDS-PAGE)则是利用不同大小的蛋白质在PAGE胶中泳动速率不同，即通过蛋白质分子量大小来区分。

3 聚丙烯凝胶电泳的基本原理是蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中，可因为自身大小缘故在凝胶的孔洞中运动，越大的蛋白受到的阻力越大，因此泳动越慢，从而分离蛋白。SDS的作用是变性蛋白，并中和电性，使得蛋白质的泳动速率只决定于其分子量大小。

Answer 3

一种分子放置在电场中，他就会以一定的速度移向适当的电极。所以呢，根据蛋白质分子的大小、构型、形状、所带净电荷，就可以通过电泳将其混合物种不同组分给分离开来。PAGE中因浓度不同会形成大小不等的孔隙，可以让不同的分子在电场作用下穿过其中。浓度不同，孔隙大小不同，能穿过的分子也不同，一定时间的电场作用下穿过的距离也不一样。

SDS是十二烷基硫酸钠，其是常用的蛋白质的变性剂,可以中和电性，使蛋白质的泳动速率只取决于分子的大小~