Question

基因克隆的具体操作步骤是什么?

我是学生物的，可是我对生物一窍不通，现在要做毕业试验了。题目是《高温灵菌红素产生菌的基因克隆与鉴定》。我的老师说引物序列已经设计好了，我的任务就是进行相关基因的克隆，可是我还是不知道怎么克隆，有哪些步骤啊，万分感谢啊！！！

Answer 1

你好，我现在也正在做分子克隆，与你共勉~

分子克隆

1. 选择目的基因，并设计相应引物；（你现在已经有了）

2. 用引物PCR扩增目的基因片段；

3. 选择合适（抗性标记、酶切位点等）的克隆载体（为了保真扩增），并将PCR片段连接入克隆载体中；（一般用Taq酶的PCR产物在末尾会自带一个A，可在Solution 1作用下与两端各带一个T的线性T载体直接相连）

4. 将连接产物转化入感受态大肠杆菌，使之在含有抗生素的培养基上生长扩增；

5. 从大肠杆菌中提取质粒（即前面的连接产物），酶切鉴定和测序鉴定均无误后将目的基因片段切下并与新的表达载体连接，然后再次转化入大肠杆菌中扩增，再提质粒，即得到想要的目的基因片段克隆。

    

   注意克隆载体和表达载体的区别，克隆载体可大量扩增而不能表达，表达载体可表达成蛋白但复制的数量少，因此先用克隆载体大量扩增，再连入表达载体中用于实验。

   相同点式两种载体都是质粒。