Question

5.纸色谱分离叶绿体色素的操作方法及操作注意事项。12分

Answer 1

方法一：将2×22cm的滤纸的一端剪去二侧，中间留一长约1.5cm、宽约0.5cm窄条。用毛细管取叶绿体色素浓溶液点于窄条上端，用电吹风吹干，如一次点样量不足可反复在色点处点样数次，使色点上有较多的叶绿体色素。在大试管中加入四氯化碳3-5ml及少许无水硫酸钠。然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中，而色点略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁，软木塞盖紧，直立于阴暗处层析。
0.5-1小时后，观察色素带分布：最上端橙黄色(胡萝卜素)，其次黄色(叶黄素)，再崐次蓝绿素(叶绿素a)，最后是黄绿色(叶绿素b)。
方法二：取一张色层分析滤纸，剪成直径稍比培养皿直径大一点的圆形(正方形也可)，在滤纸的中心戳一小孔。另取一长5cm、宽1.5cm的滤纸条，用滴管吸取叶绿体色素提取液滴在纸条一边，使色素扩展的宽度限制在0.5cm以内，电吹风吹干后，再重复数次，(也可把浓叶绿体色素溶液放在平底培养皿中，用滤纸一侧蘸叶绿体色素)，然后将纸沿着长轴方向卷成纸捻，使浸过叶绿体色素溶液的一侧恰好在纸捻的一端。
将纸捻带有色素的一端插入图形滤纸的中心处的小孔中，使与滤纸刚刚平齐。
在培养皿内放一小烧杯(5ml)，杯内加入适量汽油和1～2滴苯，把插有纸捻的滤纸平放在培养皿上，使纸捻的下端浸在汽油中，盖好培养皿，此时汽油借毛细管引力顺捻扩散到圆形滤纸上，并把叶绿体色素沿着滤纸的四周推进，不久即可看到被分离的各种色素的同心环，待汽油将要达到培养皿边缘时，取出滤纸，用笔标出各色素位置与名称、叶绿素a呈蓝绿色，叶绿素b呈黄绿色，叶黄素呈鲜黄色胡萝卜素为橙黄色。

Answer 2

纸色谱分离色素的操作方法为纸层析法，操作注意，视线为滤液细线要画的细直齐 ，要选用新鲜的绿叶，