Question

PCR只有杂带，没有目的条带

如题，进行1200bp的PCR扩增，一直没有看到目的条带，只有杂带，是什么问题呢？

另外，请问能用降落PCR的方法吗？

Answer 1

1. 有可能是没有目标基因，导致PCR只有杂带

2. PCR片段过长，无法得到目标产物

PCR说明：

聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年，PCR已发展到第三代技术。1973 年，台籍科学家钱嘉韵，发现了稳定的Taq DNA聚合酶，为PCR技术发展也做出了基础性贡献。

Answer 2

1200bp 这么长的片段，很难P出来的啊~...
1.2k叫很难P 开玩笑
第一我想说1.2K不难P的 我觉你这种情况就是用降落PCR也没用
降落PCR 一般是老P不到东西 就是没有杂带也没有主带 摸摸条件 你有杂带没主带是不能用的
你说你老P不到 先检查下引物设计的对不对 然后在换个模板试试 退火温度降低到50度 看看有没有目的带

对了你说的杂带不会是引物2聚体吧?

Answer 3

你这是没有P出特异性条带来！杂带是什么样子的，有图吗？可能是非特异性条带和引物二聚体。。。

这么长的片段，很难P出来的啊~

应该可以用降落PCR的！

Answer 4

你的模板有问题么？

Answer 5

建议你P的时候做一个温度梯度，看是不是温度问题，如果还是不行那你可能要重新设计引物了。
杂带极有可能是引物二聚体哦