Question

3．下表为5种限制性核酸内切酶（ 以下简称“限制酶”）的识别序列和切割位点（箭头位置），

某线性DNA分子含有4个B amH I的识别序列、4个Bst I的识别序列，3个 BgI II的识别序列；据此判断下列叙述中，正确的是
A．该DNA分子能被Sau3AI切成12个片段
B．一种特定序列只能被一种限制酶识别并在特定位点被切割
C．两个能够互补配对的DNA片段所具有的粘性末端一定相同
D．用BgI II、BamH I两种限制酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，BamH I的识别序列将少于4个

Answer 1

应该选D

C的答案比较难理解，大家都知道不同的酶产生的粘性末端可以相同，所以D的答案很容易理解，如BgI II、BamH I两种限制酶。但也有些酶比较特殊，同种酶切出来的粘性末端是不一样的，如BbvC

根据限制酶切割的特点，可将它们分为两大类：一类是切割部位无特异性的；另一类是可特异性地识别核苷酸序列。这种能被特异性识别的切割部位都具有回文序列，也就是在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致。

有一些限制酶的识别序列不是对称的，如 AccBSⅠ 和BssSⅠ
AccBSⅠ CCG↓CTC BssSⅠ C↓TCGTG
GGC↑GAG GAGCA↑C
有一些限制酶可识别多种序列，如 AccⅠ 识别的序列是 GT↓MKAC ，也就是说可识别 4种序列，其中两种是对称的，另两种是非对称的。
有一些限制酶识别的序列呈间断对称，对称序列之间含有若干个任意碱基。如AlwNⅠ 和DdeⅠ，它们的识别序列如下。
AlwNⅠ CAGNNNC↓TG DdeⅠ C↓TNAG
GT↑CNNNGAC GANT↑C

限制酶在特定切割部位进行切割时，按照切割的方式，又可以分为错位切和平切两种。
（1）识别位点为回文对称结构的序列经限制酶切割后，产生的末端为匹配粘端，亦即粘性末端，这样形成的两个末端是相同的，也是互补的。
（2）平末端在回文对称轴上同时切割 DNA 的两条链，则产生平末端
（3）非对称突出端
许多限制酶切割 DNA 产生非对称突出端。当识别序列为非对称序列时，切割的DNA 产物的末端是不同的，如 BbvCⅠ，它的识别切割位点如下。
-CC↓TCAGC- 产生的粘性末端为 -CC 和 TCCAGC-
-GGAGT↑CG- -GGAGT CG-
有些限制酶识别简并序列，其识别的序列中有几种是非对称的。如AccⅠ，它的识别切割位点如下，其中GTAGAC和 GTCTAC 为非对称。
GT↓AT/CGAC
CATA/GC↑TG