Question

什么是PCR检测？他的原理是什么？需要什么材料？

Answer 1

PCR（聚合酶链反应）：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

基本原理：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性主要依赖于和靶序列两端互补的寡核苷酸引物，它由变性——复性——延伸三个基本反应步骤构成。

所需材料：

1. 模板DNA

2. 正二价镁离子

3. 引物

4. 反应缓冲液

5. TAQDNA聚合酶

拓展回答：

反应特点

1. 特异性强。

   PCR反应的特异性决定因素为：

   ①引物与模板DNA特异正确的结合。

   ②碱基配对原则。

   ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性。

   ④靶基因的特异性与保守性。

2. 灵敏度高。

   PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12）量级的起始待测模板扩增到微克（μg=-6）水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位）；在细菌学中最小检出率为3个细菌。

3. 简便、快速。

   PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。

4. 纯度要求低。

   不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测。