Question

菌物的分离培养有哪些步骤?

Answer 1

在研究病原菌的形态、生理、生态以及病原菌对寄主植物的致病性等多种试验中，常需要病原菌的纯培养物。分离和培养是植病实验最基本的操作技术之一。病原菌分离的方法因材料不同而异。菌物病害最常见的方法有组织分离法、菌物直接挑取法和菌物表面消毒法。
(1)组织分离法的主要步骤有：①取病、健交界病组织；②在70%的乙醇中浸泡数秒；③在10%次氯酸钙溶液中消毒3～5min；④在无菌水中洗3次，每次3min；⑤然后直接移至PSA平板培养基(或其他适宜的培养基)上，倒置于温箱中培养，待菌落长出后，再进行纯化。
(2)菌物直接挑取法的主要步骤有：①取长有菌物的病组织；②在低倍显微镜下，用玻璃针或其他尖细的针状物，直接获得菌物的分生孢子或菌丝体；或用玻璃球取分生孢子，涂抹在加有抑制细菌的抗生素的琼脂平板上，将平板倒置于温箱中培养，6h后，待孢子萌发，在低倍显微镜下，用尖细的接种针，直接挑取菌物萌发的分生孢子或孢子的芽管；③将上述获得的菌丝体、分生孢子或芽管转入PSA斜面培养基或平板培养基(或其他适宜的培养基)；④将培养基置于培养箱中培养。
(3)菌物直接表面消毒法的主要步骤有：①取菌物休眠体(如菌核或菌索)；②放于70%乙醇中浸泡3～8min；或在70%的乙醇中浸泡数秒，在10%次氯酸钙溶液中消毒5～8min；③在无菌水中洗3次，每次3min；④然后直接移至PSA平板培养基(或其他适宜的培养基)上，倒置于温箱中培养，待菌落长出后，再进行纯化。