Question

哪些实验室诊断能自己做？怎么做？

Answer 1

要养鸡，就会有鸡生病。鸡有了病，就必须尽快诊断，以便明确病因，采取措施，减少损失。即使是有丰富经验的养殖人员，面对大量的鸡病，也难以凭经验进行准确的判断。要确诊，除了综合流行病学、临床检查和病理剖检的各方面结果外，最重要的是实验室诊断。在农村中小型鸡场，由于实验设备条件和技术原因，难以开展实验室诊断。但是，有的实验方法所需要的技术要求并不高，具有初中文化程度和经一定的学习培训是能够掌握的。下面介绍部分比较简单的方法，供参考应用。

（1）直接抹片镜检。

诊断曲霉菌病：加一滴水在载玻片上，再从肺部或气囊上取结节病灶，用另一玻片压碎、抹薄，在低倍显微镜下观察菌丝和孢子。

诊断球虫病：于病变肠段刮取或直接取少量粘膜，或取少量肠内容物，置载玻片上，抹薄，加一滴清水，于低倍镜下观察有无球虫。

（2）制片染色镜检。其主要过程为涂片、固定、染色、镜检。

涂片：剪一块肝或脾，将切面在洁净玻片上轻压一下，留下压迹，自然干燥。检验血液或其他液态病料时，用无菌玻片的一端蘸取少量液体，在另一无菌玻片中间均匀推出一涂面，自然干燥。前者称触片，后者称涂片。

固定：触片或涂片制好后，用火焰固定灭菌，即在酒精灯火焰的上方迅速地来回通过3～4次，使片温大约达到60℃即可。

染色：常用美蓝染色和革兰氏染色。

美蓝染色：以30毫升美蓝（亚甲蓝）酒精溶液（0.3克美蓝加30毫升酒精）与100毫升氢氧化钾溶液（0.01克氢氧化钾溶解于100毫升蒸馏水）即配成染色液（平时配好备用）。将染色液滴于触片或涂片上，约2分钟后倾去；再用清水冲洗，用吸水纸吸干或自然干燥后即可镜检。

革兰氏染色：用0.5%结晶紫水溶液滴于触片或涂片上，经半分钟倾去；倾去结晶紫溶液后，加碘溶液（碘片1克、碘化钾2克、蒸馏水100毫升配成），并保留约1分钟；用酒精洗去碘液，再用清水冲洗；用中性红溶液（中性红1克、1%醋酸2毫升、蒸馏水1000毫升配制）复染2～4分钟。最后用清水冲洗，用吸水纸吸干或自然干燥。

镜检：用油镜观察，染成紫色的细菌是革兰氏阳性菌，红色为阴性菌。

（3）琼脂扩散。鸡传染性法氏囊炎、传染性脑脊髓炎和马立克氏病等均可用本试验诊断。其原理是抗原抗体在固体载体上扩散发生特异性结合出现可见沉淀带。具体操作是：

①浇板：取琼脂糖1克，氯化钠0.85克，1%硫柳汞1毫升，加蒸馏水至100毫升，在沸水浴融化，调整pH为7.0～7.4，在直径8厘米的玻璃平皿中注入15毫升（琼脂约2～3毫米），自然冷却凝固。②打孔：用金属管（直径约3毫米）在琼脂板上打孔，每7孔为一组，即中央1孔，周围6孔，中央孔边与周围孔边距离4毫米。然后用注射针挑去孔内琼脂，并将玻皿底部在垫有石棉网的电炉上稍加热，使琼脂板略微融化，封住孔底。③加样反应在中央孔加入抗原，周围孔加被检鸡血清；或在中央孔加抗体（阳性血清），在周围4个孔加被检鸡样品（抗原），另2个孔加阳性抗原（如图）。如有相应的抗体或抗原经24小时（室温）反应就会在中央孔和周围孔之间出现白色沉淀带。诊断不同的传染病可分别用其中一种。供试验用的标准抗原和标准抗体（阳性血清）统称诊断液，可从兽医科研单位购买。诊断液是生物制剂，需低温保存，一般只有6个月的保存期。

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图 琼脂扩散试验

1.中心孔加阳性血清 2.5孔加标准抗原 3、4、6、7.孔加被检抗原 4、7.孔被检阳性 3、6.被检阴性

诊断传染性法氏囊炎和鸡传染性脑脊髓炎按上述步骤操作。在诊断鸡马立克氏病时，在中央孔加入标准阳性血清，周围只打相对两个对照孔，加标准抗原，其余4个孔插被检鸡的羽毛根。一般选用大腿外侧的羽毛，要用羽髓丰满的，每只鸡取6根，3根为一组，插在一孔位上，并插到底，上面稍露出一点（多余的先剪去）。

（3）血凝试验和血凝抑制试验。鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征等病毒具有凝集鸡红细胞的特性。这种凝集又可被相应的抗体所抑制。血凝试验常用英语缩写HA，血凝抑制试验则为HI。HA可用来检测病毒抗原，HI可用来检测抗体。