目的基因要怎样分离?
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2019-06-15 · 农业农村部直属的大型综合出版社
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作为目的基因,其表达产物应该有较大的经济效益或社会效益,如那些特效药物相关的基因和降解毒物相关的基因等。
但是那些表达产物有害的基因,也不是绝对不能作为目的基因,往往在特殊需要的情况下也作为目的基因进行使用,如毒素基因等。选用什么样的目的基因是基因工程设计必须优先考虑的问题,如何分离获得目的基因是基因工程操作的重要技术之一。
目前,目的基因主要来源于各种生物。真核生物染色体基因组,特别是人和动植物染色体基因组中蕴藏着大量的基因,是获得目的基因的主要来源。虽然原核生物的染色体基因组比较简单,但也有几百、上千个基因,也是目的基因来源的候选者。此外,质粒基因组、病毒(噬菌体)基因组、线粒体基因组和叶绿体基因组也有少量的基因,往往也可从中获得目的基因。
根据实验需要,待分离的目的基因可能是一个基因编码区,或者包含启动子和终止子的功能基因;可能是一个完整的操纵子,或者由几个功能基因、几个操纵子聚集在一起的基因簇;也可能只是一个基因的编码序列,甚至是启动子或终止子等元件。而且不同基因的大小和组成也各不相同,因此获得目的基因有多种方法。目前采用的方法主要有酶切直接分离法、构建基因组文库或cDNA文库分离法、PCR扩增法和化学合成法等。
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