Question

生物工程生产胰岛素的步骤.想解决目的基因如何获取?

Answer 1

1,目的基因的获取：通过各种手段（基因文库,化学合成,PCR技术等）获取胰岛素基因
2,基因表达载体的构建：一般采用质粒,用同一种限制酶切割质粒和切取目的基因（胰岛素基因）使产生相同的粘性末端,将切取的胰岛素基因片段插到质粒的切口处,再用DNA连接酶使质粒和胰岛素基因结合成重组质粒
3,将重组质粒导入受体细胞（如大肠杆菌,用感受态细胞法即Ca+处理）
4,检测与鉴定目的基因获得途径：
1限制性内切酶酶切法
2利用PCR技术直接扩增目的基因
3目的基因的化学合成
4通过构建基因组文库或CDNA文库分离目的基因
5反向转录法分离目的基因

希望对你有帮助.