什么叫柱色谱法
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2022-10-04 · 试剂订购热线:400-968-6088
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柱色谱法,又称层析法。是一种以分配平衡为机理的分配方法。柱色谱主要分为吸附柱色谱、分配柱色谱两种。
1. 吸附柱色谱原理
在一定条件下,硅胶与被分离物质之间产生作用,这种作用主要是物理和化学作用两种.物理作用来自于硅胶表表面与溶质分子之间的范德华力.化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键作用。色谱管为内径均匀、下端缩口的硬质玻璃管,下端用棉花或玻璃纤维塞住,管内装入吸附剂。吸附剂的颗粒应尽可能保持大小均匀,以保证良好的分离效果。除另有规定外,通常多采用直径为0.07~0.15mm的颗粒。色谱柱的大小,吸附剂的品种和用量,以及洗脱时的流速,均按各品种项下的规定。
在吸附柱色谱中,吸附剂是固定相,洗脱剂是流动相,相当于薄层色谱中的展开剂。吸附剂的基本原理与吸附薄层色谱相同,也是基于各组分与吸附剂间存在的吸附强弱差异,通过使之在柱色谱上反复进行吸附、解吸、再吸附、再解吸的过程而完成的。所不同的是,在进行柱色谱的过程中,混合样品一般是加在色谱柱的顶端,流动相从色谱柱顶端流经色谱柱,并不断地从柱中流出。由于混合样中的各组分与吸附剂的吸附作用强弱不同,因此各组分随流动相在柱中的移动速度也不同,最终导致各组分按顺序从色谱柱中流出。如果分步接收流出的洗脱液,便可达到混合物分离的目的。一般与吸附剂作用较弱的成分先流出,与吸附作用较强的成分后流出。
2. 分配柱色谱原理
方法和吸附柱色谱基本一致。装柱前,先将载体和固定液混合,然后分次移入色谱柱中并用带有平面的玻棒压紧;供试品可溶于固定液,混以少量载体,加在预制好的色谱柱上端。洗脱剂需先加固定液混合使之饱和,以避免洗脱过程中两相分配的改变。
1. 吸附柱色谱原理
在一定条件下,硅胶与被分离物质之间产生作用,这种作用主要是物理和化学作用两种.物理作用来自于硅胶表表面与溶质分子之间的范德华力.化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键作用。色谱管为内径均匀、下端缩口的硬质玻璃管,下端用棉花或玻璃纤维塞住,管内装入吸附剂。吸附剂的颗粒应尽可能保持大小均匀,以保证良好的分离效果。除另有规定外,通常多采用直径为0.07~0.15mm的颗粒。色谱柱的大小,吸附剂的品种和用量,以及洗脱时的流速,均按各品种项下的规定。
在吸附柱色谱中,吸附剂是固定相,洗脱剂是流动相,相当于薄层色谱中的展开剂。吸附剂的基本原理与吸附薄层色谱相同,也是基于各组分与吸附剂间存在的吸附强弱差异,通过使之在柱色谱上反复进行吸附、解吸、再吸附、再解吸的过程而完成的。所不同的是,在进行柱色谱的过程中,混合样品一般是加在色谱柱的顶端,流动相从色谱柱顶端流经色谱柱,并不断地从柱中流出。由于混合样中的各组分与吸附剂的吸附作用强弱不同,因此各组分随流动相在柱中的移动速度也不同,最终导致各组分按顺序从色谱柱中流出。如果分步接收流出的洗脱液,便可达到混合物分离的目的。一般与吸附剂作用较弱的成分先流出,与吸附作用较强的成分后流出。
2. 分配柱色谱原理
方法和吸附柱色谱基本一致。装柱前,先将载体和固定液混合,然后分次移入色谱柱中并用带有平面的玻棒压紧;供试品可溶于固定液,混以少量载体,加在预制好的色谱柱上端。洗脱剂需先加固定液混合使之饱和,以避免洗脱过程中两相分配的改变。
利穗科技
2024-04-23 广告
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本回答由利穗科技提供
2023-07-01
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柱色谱法(Column Chromatography)是一种基于分配和吸附原理的分离和纯化技术,常用于化学、生物化学、制药等领域的分析和纯化过程中。它通过将待分离混合物溶解在适当的溶剂中,经过填充在柱中的固定相,利用固定相与溶剂之间的相互作用,实现不同组分之间的分离。
在柱色谱法中,首先选择一种适合的色谱柱,它通常是由玻璃或不锈钢制成的管状结构。柱内填充了一种固定相材料,称为填料或固定相。常见的填料有硅胶、氧化铝、分子筛等,根据需要也可以选择其他特定的填料。填料可以提供一定的分离效果,并与待分离物质发生吸附或分配作用。
在进行柱色谱时,将待分离的混合物样品溶解于流动相(溶剂系统),然后通过样品注入口将样品注入到色谱柱的顶部。样品在柱内与固定相发生相互作用,不同组分根据其与固定相的亲合性或分配系数的差异,以不同的速度通过柱。结果是,不同组分在柱中分离开来,形成不同的带状色带。
随着流动相的流动,分离出的组分按顺序从柱中洗脱出来。最后,通过检测器对洗脱的组分进行监测和记录,可以得到各组分的相对含量和纯度信息。常用的检测器包括紫外-可见吸收检测器、荧光检测器、质谱检测器等。
柱色谱法的原理基于不同组分在固定相和流动相之间的相互作用,包括吸附、分配、离子交换、凝胶渗透等。通过选择合适的固定相和流动相条件,调节柱温、流速等参数,可以实现对复杂混合物的高效分离、纯化和分析。
在柱色谱法中,首先选择一种适合的色谱柱,它通常是由玻璃或不锈钢制成的管状结构。柱内填充了一种固定相材料,称为填料或固定相。常见的填料有硅胶、氧化铝、分子筛等,根据需要也可以选择其他特定的填料。填料可以提供一定的分离效果,并与待分离物质发生吸附或分配作用。
在进行柱色谱时,将待分离的混合物样品溶解于流动相(溶剂系统),然后通过样品注入口将样品注入到色谱柱的顶部。样品在柱内与固定相发生相互作用,不同组分根据其与固定相的亲合性或分配系数的差异,以不同的速度通过柱。结果是,不同组分在柱中分离开来,形成不同的带状色带。
随着流动相的流动,分离出的组分按顺序从柱中洗脱出来。最后,通过检测器对洗脱的组分进行监测和记录,可以得到各组分的相对含量和纯度信息。常用的检测器包括紫外-可见吸收检测器、荧光检测器、质谱检测器等。
柱色谱法的原理基于不同组分在固定相和流动相之间的相互作用,包括吸附、分配、离子交换、凝胶渗透等。通过选择合适的固定相和流动相条件,调节柱温、流速等参数,可以实现对复杂混合物的高效分离、纯化和分析。
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