含有t7或sp6启动子质粒为什么只能在大肠杆菌菌株中发挥作用? 20
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含有t7或sp6启动子质粒只能在大肠杆菌菌株中发挥作用的原因:
T7启动子是当今大肠杆菌表达系统的主流,这个功能强大兼专一性高的启动子经过巧妙的设计而成为原核表达的首选,尤其以Novagen公司的pET系统为杰出代表。
1、强大的T7启动子完全专一受控于T7 RNA聚合酶,而高活性的T7 RNA 聚合酶合成mRNA的速度比大肠杆菌RNA聚合酶快5倍——当二者同时存在时,宿主本身基因的转录竞争不过T7表达系统,几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白;
2、诱导表达后仅几个小时目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。由于大肠杆菌本身不含T7 RNA 聚合酶,需要将外源的T7 RNA 聚合酶引入宿主菌,因而T7 RNA 聚合酶的调控模式就决定了T7系统的调控模式——非诱导条件下,可以使目的基因完全处于沉默状态而不转录,从而避免目的基因毒性对宿主细胞以及质粒稳定性的影响;
3、通过控制诱导条件控制T7 RNA 聚合酶的量,就可以控制产物表达量,某些情况下可以提高产物的可溶性部分。有几种方案可用于调控T7 RNA 聚合酶的合成,从而调控T7表达系统。
T7启动子是当今大肠杆菌表达系统的主流,这个功能强大兼专一性高的启动子经过巧妙的设计而成为原核表达的首选,尤其以Novagen公司的pET系统为杰出代表。
1、强大的T7启动子完全专一受控于T7 RNA聚合酶,而高活性的T7 RNA 聚合酶合成mRNA的速度比大肠杆菌RNA聚合酶快5倍——当二者同时存在时,宿主本身基因的转录竞争不过T7表达系统,几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白;
2、诱导表达后仅几个小时目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。由于大肠杆菌本身不含T7 RNA 聚合酶,需要将外源的T7 RNA 聚合酶引入宿主菌,因而T7 RNA 聚合酶的调控模式就决定了T7系统的调控模式——非诱导条件下,可以使目的基因完全处于沉默状态而不转录,从而避免目的基因毒性对宿主细胞以及质粒稳定性的影响;
3、通过控制诱导条件控制T7 RNA 聚合酶的量,就可以控制产物表达量,某些情况下可以提高产物的可溶性部分。有几种方案可用于调控T7 RNA 聚合酶的合成,从而调控T7表达系统。
利穗科技
2024-04-23 广告
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T7 启动子本是侵染大肠杆菌的T7噬菌体的启动子。我们常用的表达菌(Rosetta、BL21)是由普通的E. coli strain K12认为加入能够识别T7启动子的病毒性T7 RNA聚合酶,从而让含有T7启动子的质粒(如pET、pGEM)能成为表达载体。普通的大肠杆菌自身并不识别T7.
SP6启动子作用机制与T7近似
SP6启动子作用机制与T7近似
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写错地方了吧?
可能是这类 启动子质粒 最初是在大肠杆菌中发现的,其发挥作用也必须要用到一定的条件,估计只有大肠杆菌才具备里面的具体条件吧.
值得实验研究一下.
可能是这类 启动子质粒 最初是在大肠杆菌中发现的,其发挥作用也必须要用到一定的条件,估计只有大肠杆菌才具备里面的具体条件吧.
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