Question

如图1所示，已知质粒pZHZ1的大小为3.7kb（1kb=1000对碱基），限制酶G切割位点距限制酶E切割位点0.8kb，限

如图1所示，已知质粒pZHZ1的大小为3.7kb（1kb=1000对碱基），限制酶G切割位点距限制酶E切割位点0.8kb，限制酶E切割位点距限制酶F切割位点0.2kb，限制酶F切割位点距限制酶H切割位点0.5kb．现用限制酶E和F（两种酶识别切割序列完全不同）从某DNA上切下目的基因，并将之取代质粒pZHZ1上相应的E-F区域，请回答下列问题：（1）所形成的重组质粒pZHZ2______（能或不能）被限制酶E或F切开．（2）若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样品，酶切结果如下表所示．则目的基因的大小为______kb，目的基因内部的限制酶G和H切割位点分别位于图2中的位置______ 和______上（要求填0～11中的某个数字）．（3）若想获得转上述目的基因的山羊，则需将重组质粒pZHZ2通过______法导入至山羊的______（细胞）中，经胚胎早期培养后，再进行______（技术），使其发育成为转基因山羊．（4）若pZHZ2进入细胞后插入在一条染色体DNA上，那么获得转基因纯合子山羊的方式是______．

Answer 1

（1）一种限制性内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子，完全不同的限制酶E和F从合成的DNA上切下目的基因，并将之取代质粒pZHZ1上相应的E-F区域 （0.2kb），所以重组质粒中同时含有限制酶E、F的切割位点，因此可以被限制酶E或F切开．
（2）已知质粒pZHZ1的长度为3.7kb，其中EF区域长度为0.2kb，所以切去EF段后的质粒长度为3.7-0.2=3.5kb．现用限制酶G切割重组质粒pZHZ2样品，结果被酶G切割成1.6kb和3.1kb两个片段，可知重组质粒pZHZ2的总长度为1.6+3.1=4.7kb，所以目的基因长度为4.7-3.5=1.2kb．
重组质粒中G的切割位点距E的切割位点0.8kb，单独用限制酶G切割后产生1.6kb和3.1kb两个片段，说明在重组质粒中除了图中标示出来的G酶识别位点外，还有一个G酶识别位点，可断定G的识别位点，在距离E点右侧1.6-0.8=0.8kb处；H酶的酶切位点距F0.5kb，用H单独酶切后产生1.2kb和3.5kb两个片段，说明在重组质粒中含有一个H的酶切位点，可确定在EF之间含有H的一个识别位点，H的识别位点在距F左侧1.2-0.5=0.7kb处．即目的基因内部的限制酶G和H切割位点分别位于图2中的位置8和5上．
（3）将目的基因导入动物细胞中，通常以受精卵为受体细胞，利用显微注射法导入目的基因；经胚胎早期培养后，再进行胚胎移植，使其发育成为转基因山羊．
（4）重组质粒若插入一条染色体DNA上后，可通过雌雄转基因山羊杂交的方法来获取转基因纯合子山羊．
故答案为：
（1）能
（2）1.2      8      5
（3）显微注射    受精卵    胚胎移植
（4）让转基因山羊相互交配