细菌的纯种分离和接种技术注意事项有哪些
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细菌的纯种分离和接种技术中,需要注意的事项有:稀释度的问题纯种分离的时候,无非是把菌液稀释一定梯度后,涂布在诸如LB培养基上。
如果没有稀释好,就会导致细菌长得太密,或者是细菌根本不长。最优的稀释梯度是最后在平板上的菌落数在30至300之间。此时,能清楚地看清菌落的形态,便于挑取单菌落。
基本形态与大小:
有以下几种类型:
①单球菌:单独存在,如尿素小球菌;
②双球菌:如肺炎双球菌;
③链球菌:如乳酸链球菌;
④四联球菌:形成的4个细胞排列在一起,成田字,如四联球菌;
⑤八叠球菌:如尿素生孢八叠球菌;
⑥葡萄球菌:如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
长宽相差较大的棒杆状或长杆状菌,如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、梭状杆菌(Bacterium fusiformis);分枝状或叉状菌,如双歧杆菌属(Bifidobacterium);竹节状(两端平截),如炭疽芽孢杆菌(Bacillusanthracis)等。
以上内容参考:百度百科-细菌
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细菌的纯种分离、接种技术需要注意的事项需从分离接种培养各环节说起。比如:1、取样:需要分菌的样品取样需指定严格的取样操作流程,并备好需要用的无菌采样器,确定取样地点取样素材。然后带好无菌采样器,在无菌操作下取样;如果现场无法做到无菌,至少需要做到不受取样素材意外的因素影响下取样。比如:去土壤,清理现场取样地的土壤,去除不需要的干扰杂质。取样后,运输过程需要无菌,低温;并尽快带回实验室,分菌;2.分菌过程:备好目标菌需要的分离培养基、培养皿、取样环、酒精灯、无菌操作台;将培养基灭菌后制无菌平板,在无菌操作台内无菌挑取采样素材或一定量融水后,用取样环挑取溶解后的水划线分菌;3.培养过程:划好线的平板,至于恒温培养箱在目标菌适宜生长温度下培养适宜时间,并定期看看菌是否长出,待长出合适大小菌落后,纯化;4、纯化:将长好目标菌的平板在无菌操作台内,用无菌取样环挑取典型单菌落,并在无菌平板上划线纯培。5、培养:直至目标菌出现统一、单菌落后,生化和测序鉴定,鉴定成功后保存。
即分离纯培结束。
即分离纯培结束。
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细菌的纯种分离和接种技术中,需要注意的事项有:
1)稀释度的问题
纯种分离的时候,无非是把菌液稀释一定梯度后,涂布在诸如LB培养基上。如果没有稀释好,就会导致细菌长得太密,或者是细菌根本不长。最优的稀释梯度是最后在平板上的菌落数在30至300之间。此时,能清楚地看清菌落的形态,便于挑取单菌落;
2)杂菌污染的问题
因为用于接种的一般都是营养丰富的有机培养基,这种培养基适合任何细菌生长。在操作过程中,空气和桌面上都会有大量看不见的细菌潜在。在分离和接种前,所有用到的器具和培养基必须在121摄氏度下灭菌20分钟至30分钟。在倒平板时,最好在培养基还是热的时候倒,以减少杂菌感染。所有的操作最好在超净工作台上完成。若没有超净工作台,那就拿两个酒精灯点燃,并用酒精擦拭桌面,在两个酒精灯之间操作。
综上,想要较好地分离和接种细菌,操作人员必须完全保证杂菌的感染,操作熟练,在温度和洁净度上做到最严格。
1)稀释度的问题
纯种分离的时候,无非是把菌液稀释一定梯度后,涂布在诸如LB培养基上。如果没有稀释好,就会导致细菌长得太密,或者是细菌根本不长。最优的稀释梯度是最后在平板上的菌落数在30至300之间。此时,能清楚地看清菌落的形态,便于挑取单菌落;
2)杂菌污染的问题
因为用于接种的一般都是营养丰富的有机培养基,这种培养基适合任何细菌生长。在操作过程中,空气和桌面上都会有大量看不见的细菌潜在。在分离和接种前,所有用到的器具和培养基必须在121摄氏度下灭菌20分钟至30分钟。在倒平板时,最好在培养基还是热的时候倒,以减少杂菌感染。所有的操作最好在超净工作台上完成。若没有超净工作台,那就拿两个酒精灯点燃,并用酒精擦拭桌面,在两个酒精灯之间操作。
综上,想要较好地分离和接种细菌,操作人员必须完全保证杂菌的感染,操作熟练,在温度和洁净度上做到最严格。
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最主要的注意事项就是防止杂菌污染。
一般细菌都是接种在固体培养基上,细菌生长出菌落以便分离。接种的工作环境应该清洁卫生,一般在超净工作台内作业,接种时要注意将接种用的接种器放到酒精灯上烤一下,待接种器的温度降低后再挑取菌种。
一般细菌都是接种在固体培养基上,细菌生长出菌落以便分离。接种的工作环境应该清洁卫生,一般在超净工作台内作业,接种时要注意将接种用的接种器放到酒精灯上烤一下,待接种器的温度降低后再挑取菌种。
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