Question

如何用pcr测未知基因的序列

以前没有学过分子生物学 希望能用通俗的话解释 还有想问下1 pcr有什么应用
2从提取rna 到cDNA 在进行pcr 之后还能进行什么 3我所测得基因序列是未知的，是不是在设计引物时只能找亲缘相近的 那我pcr之后得到的基因序列 又不能确定是不是我想要的 这又该怎么办呢？ 谢谢了

Answer 1

PCR是用来扩增目的片段的，可以富集你想要的片段然后用来测序或者克隆基因，可以在这个片段上做点突变，甚至可以用来测定目的片段在原始模版当中的丰度（包括有无）。
cDNA除了进行PCR，也可以用来做cDNA文库
第三个问题完全听不懂，不知道你的基因未知到什么程度，如果你完全不知道他的序列，你怎么确定他是一个什么基因，跟什么比较接近，又怎么设计引物呢，不清楚你要的是个什么标准。测序的话都是用TA克隆将PCR产物克隆到质粒上，拿单克隆去测的。这样测序不需要特异性引物。

Answer 2

PCR是一种体外快速扩增DNA的方法，用于放大特定的DNA片段，数小时内可使目的基因片段扩增到数百万个拷贝的分子生物学技术。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
cDNA除了进行PCR，也可以用来做cDNA文库.
第三个问题一般不会出现.