动物细胞培养的条件
动物细胞培养的条件如下:
1、无菌、无毒的环境
对培养液和所有培养用具进行无菌处理,通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外应定期更换培养液,以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
2、营养物质
无机物(无机盐、微量元素等),有机物(糖、氨基酸、促生长因子等)。血清和血浆(提供细胞生长必须的营养成份)
3、温度和气体环境
温度和pH(36.5±0.5℃,7.2至7.4);气体环境(95%的空气+5%CO₂的混合气体)其中5%CO₂气体是为保持培养液的pH稳定。
4、培养液成分
体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同,例如,需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基,称为合成培养基。
动物细胞培养分类:
1、原代细胞
将动物各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,在合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。培养的细胞为正常的动物细胞,一般培养10代后不再增殖,死亡。
2、传代细胞
传代培养是细胞培养常规保种方法之一,也是所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶,细胞才能继续生长,这一过程就叫传代。传代培养可获得大量供实验所需细胞。
细胞传代要在严格的无菌条件下进行,每一步都需要认真仔细地无菌操作。培养的细胞为癌变或人为癌化的细胞,理论上可以无限增殖。癌化的方式有很多:进行癌基因突变,感染病毒,从癌症供体体内分离,物理或化学方法(如紫外,化学试剂)等。