Question

BCA法、凯氏定氮法、Brarford法、甲醛滴定法中哪个方法测多肽含量比较好？

BCA法、凯氏定氮法、Brarford法、甲醛滴定法中哪个方法测多肽含量比较好？注意是多肽含量而不是蛋白质含量。并说一下那个方法的原理哈！

Answer 1

Bicinchoninic acid (BCA )法是近来广为应用的蛋白定量方法。其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。

凯氏定氮法原理：蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

Brarford法原理：考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax），由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。 在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。

甲醛滴定法原理：水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。

综上，甲醛滴定法直接排除，因为是计算氨基酸含量的。BCA法和Brarford法原理对蛋白质中的某些氨基酸的要求比较严格，适用于大型蛋白的定量，而如果你是较短的多肽的话可能会有比较大误差。因此凯氏定氮法比较准确。