Question

如何用western来检测基因的磷酸化水平？

Answer 1

应该是蛋白质的磷酸化水平吧。用特异性识别磷酸化位点的抗体来做western blot，再用普通的不识别磷酸化位点的抗体做一遍，比较一下强度比值即可。但很多磷酸化位点的抗体不好买或者识别效果不好，还有磷酸化水平很低，难以检测到。这时可能需要先用TiO2等方法富集磷酸化蛋白，再按上面的方法用两种抗体来做western blot。

Answer 2

使用磷酸化的抗体与非磷酸化的抗体，免疫印迹后作比较即可实现。

Answer 3

否则没有对照啊，我们比较的是磷酸化程度的大小，光有分子不行，还得有分母，这样出来的百分比才有可比性，非磷酸化的蛋白水平就是分母。