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如何用western来检测基因的磷酸化水平?
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应该是蛋白质的磷酸化水平吧。用特异性识别磷酸化位点的抗体来做western blot,再用普通的不识别磷酸化位点的抗体做一遍,比较一下强度比值即可。但很多磷酸化位点的抗体不好买或者识别效果不好,还有磷酸化水平很低,难以检测到。这时可能需要先用TiO2等方法富集磷酸化蛋白,再按上面的方法用两种抗体来做western blot。
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使用磷酸化的抗体与非磷酸化的抗体,免疫印迹后作比较即可实现。
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否则没有对照啊,我们比较的是磷酸化程度的大小,光有分子不行,还得有分母,这样出来的百分比才有可比性,非磷酸化的蛋白水平就是分母。
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