Question

柱层析操作中要注意什么问题

Answer 1

柱层析操作中要注意装柱、淋洗剂的选择及样品的收集、最后的处理。

1、装柱：

柱子下面的活塞不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。装完的柱子应该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。

不能见到气泡，在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就全下来了。当然假如你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。但是柱子更忌讳的是开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！

2、淋洗剂的选择及样品的收集：

淋洗剂的选择，要使所需点在rf0.2～0.3左右的比较好。不要认为在板上爬高了分的比较开，过 柱子就用那种极性，假如rf在0.6，即使相差0.2也不轻易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的状态，可以通过公式的比较：0.6/0.8一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。

样品的收集，用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以假如样品与硅胶的吸附比较强的话，就不轻易流出。这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。这时可以 采用氧化铝作固定相。另外，收集的试管大小要以样品量而定，非凡是小量样品，假如用大试管，可能一根就收到了三个样品。假如都用小试管那工作量又太大。

3、最后的处理：

柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以假如想送分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没了，必要时进行重结晶。

另外，再过柱的时候，有时会出现气泡，一是和使用的溶剂有关，假如是易挥发的溶剂，如乙醚、二氯甲烷等，在室温稍高的情况下，很轻易出现这种现象，因此，在室温高的时候，可以选择沸点较高，挥发相对小的溶剂。还有，使用混合溶剂时，使用的两种溶剂的沸点应该相差不大，