Question

RNA提取原理

RNA提取时，加氯仿后分三层：水相(含rna,可能还有少量DNA），中间白色薄层（应该是蛋白和DNA），下层有机相（氯仿和蛋白等）

有几个疑问：
1.dna是核酸，核酸不溶于醇等有机溶液，但可溶于水。那DNA也应该和RNA一样主要溶于上层水相吧？
2.蛋白属有机物，应溶于下层有机相吧 ?
3.既然DNA溶于水相了，蛋白溶于有机相了，那中间的白色薄层又是什么？
4.氯仿是重质有机溶剂，所以比水重，在下层。那如果白色中间层是DNA和蛋白，DNA和蛋白是大分子，应该比氯仿重才对，即白色中间层应在有机相的下面才对，怎么在中间呢？

如果能让我完全明白会额外给20分。谢谢！
5.下层有机相除氯仿外还有什么？

附：上清不含DNA的原因：
1.因为细胞中存在DNA酶，在提取之前细胞破碎的时候没有加DNA酶抑制剂，DNA已经被分解了。
2.上层水相，PH 5.1左右，当溶液pH在酸性的时候，DNA分子就会沉淀在酚与溶液的界面，只有RNA分子留在水相。而当pH接近中性时，DNA就会溶解在水相，（导致PH中性的大概原因是trizol与样品比例不对，应该尽量保证提取量的前提下使trizol过量）

Answer 1

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:

Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。

Trizol作用原理:

在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。

水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

扩展资料:

抽提RNA的使用目的

RNA用于不同的后续实验，其质量要求不尽相同。

cDNA文库构建要求RNA完整而无酶反应抑制物残留；

Northern对RNA完整性要求较高，对酶反应抑制物残留要求较低；

RT-PCR对RNA完整性要求不太高，但对酶反应抑制物残留要求严格。因此，明确实验目的是进行后续实验的首要条件。

参考资料来源:百度百科-RNA

Answer 2

蛋白质在有机溶剂中变性所以形成沉淀，中间那白色的是变性的蛋白质。
我们做过提取DNA的实验，用的是饱和酚提取的，后来又用了氯仿的。DNA、RNA很容易被分解，特别是RNA，RNA酶到处都有，我们在做DNA提取时用到EDTA抑制DNA酶的活性，防止被降解。
分层不是看分子的大小的，看它在离心力的作用下运动的快慢，一般密度大的运动的快一些在下面。
下层有机相中有一些脂类

Answer 3

DNA不是单独存在于细胞中的，是染色体

蛋白质是有机物没错，但是它是复杂的有机物，有亲水基，疏水基，所以不是只要是有机物就溶于有机溶剂的

分层看的是密度，不是分子量的大小

Answer 4