1、平末端法，有些核酸内切酶切出的DNA分子是平末端，对DNA分子的单链末端亦可用核酸酶S1或DNA聚合酶Ⅰ来修平或补齐，然后用T4 DNA连接酶将不同片段连接起来。该法形成重组DNA分子的效率低，只及粘性末端法的1%。
2、人工接头法，1976年发展起来的。首先用化学法合成具有某种限制性内切酶识别位点的序列，通过T4 DNA连接酶的作用连接到两种待连接片段的平末端上，然后用这种限制性内切酶处理产生粘性末端，实现体外重组。
扩展资料
提高平末端连接效率的措施
1、提高T4DNA连接酶的浓度。
2、提高DNA片段的浓度。
3、降低ATP浓度，以增强连接物与DNA结合。
4、加入多胺化合物，如亚精胺，降低DNA的静电排斥力。
5、加浓缩剂，如大分子排阻物聚乙二醇（PEG）、强水化物三氯化六氨钴等。
E·coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。而T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。
参考资料来源：百度百科-平末端
参考资料来源：百度百科-基因拼接方法
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科盟
2025-08-18 广告
可使用人工关节法。
其发展于1976年。首先，采用化学方法合成具有一定限制性内切酶识别位点的序列源序列，通过T4－DNA连接酶连接到两种待连接片段的平端，然后通过这种限制性内切酶处理产生粘端，实现体外重组。
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提高平末端连接效率的措施
1、提高t4dna连接酶的浓度。
2、增加DNA片段的浓度。
3、降低ATP浓度，增强连接子与DNA的结合。
4、多胺化合物的加入，如亚精胺，减少了DNA的静电排斥。
5、加入聚乙二醇（PEG）、强水合物、三氯化钴等浓缩剂。
E、coli－DNA连接酶只能连接dsDNA片段的互补粘端，不能连接dsDNA片段的平端。T4－DNA连接酶不仅可以“缝合”双链DNA片段的互补粘端，还可以“缝合”双链DNA片段的平端，但连接平端的效率相对较低。
参考资料来源：百度百科-平末端
参考资料来源：百度百科-基因拼接方法
T4DNA连接酶也能催化限制性内切酶切割产生DNA平末端的连接。如果目的序列和载体上没有相同的限制性内切酶位点可供利用，用不同的限制性内切酶切割后的粘性末端不能互补结合。
则可用适当的酶将DNA突出的末端削平或补齐成平末端，再用T4DNA连接酶连接，但平末端连接要比粘性末端连接的效率低得多。
在分子生物学的研究中，DNA末端的连接是一极为常用的基本操作，可分为粘末端和平末端连接，
粘末端连接效率相对较高，平末端的连接效率一般非常低， 但平末端连接具有普适性，被广泛地用于将外源DNA片段的相互连接当中。
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提高平末端连接效率的措施
1、提高T4DNA连接酶的浓度；
2、提高DNA片段的浓度；
3、降低ATP浓度，以增强连接物与DNA结合；
4、加入多胺化合物，如亚精胺，降低DNA的静电排斥力；
5、加浓缩剂，如大分子排阻物聚乙二醇（PEG）、强水化物三氯化六氨钴等。
6、通常为了提高平末端的连接效率，实验者可以采用反应混合物具有低浓度(0.5mol/l)的ATP、不存在亚精胺一类的多胺、极高浓度的连接酶(50Weiss单位/ml)、高浓度的平末端、加入凝聚剂等方法，但对于极其稀有的基因来说，这些方法都不适用。
参考资料：百度百科-平末端
当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。
被限制性内切酶切断的DNA分子片段，需要一种特殊的酶——DNA连接酶来缝合，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。E·coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。而T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。
平末端连接:
T4DNA连接酶也能催化限制性内切酶切割产生DNA平末端的连接。如果目的序列和 载体
上没有相同的限制性内切酶位点可供利用，用不同的限制性内切酶切割后的粘性末端不能互补结合，则可用适当的酶将DNA突出的末端削平或补齐成平末端，再用T4DNA连接酶连接，但平末端连接要比粘性末端连接的效率低得多。
提高平末端连接效率的措施:
①提高T4DNA连接酶的浓度;②提高DNA片段的浓度;③降低ATP浓度，以增强连接物与DNA结合;④加入多胺化合物，如亚精胺，降低DNA的静电排斥力;⑤加浓缩剂，如大分子排阻物聚乙二醇(PEG)、强水化物三氯化六氨钴等。
