Question

细菌DNA提取各步骤和目的，能详细的教一下吗

Answer 1

TE是用来浮起细菌的。如果是阳性菌的话最好是用溶菌酶处理一下。
SDS可以让细胞裂解，并与核蛋白结合（当然也包括DNA）。蛋白酶K自然是降解蛋白的。到这一步可以直接用异丙醇沉淀，70%乙醇洗一次（洗去少量的盐分）。凉得差不多再用少量TE溶解就得到DNA了。
当然，在蛋白酶K处理过后，也可以用1.4M NaCl沉淀一下蛋白（DNA在此浓度溶解度增加，而蛋白减小）。或者用酚：氯仿：异戊醇（25：:24:1）PH>7.8抽提，去蛋白。其后依旧用异丙醇沉淀，70%乙醇洗。
CTAB/NaCl功能与SDS相当，但一般用于提取植物基因组。

Answer 2

BIOG离心柱法提取细菌DNA
自行准备材料：无水乙醇、PBS水及1.5mL离心管。
取出析出液和洗涤液，按以下操作：
a) 析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇；9mL加入51mL无水乙醇。
b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。
c) 配制好的析出液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
细菌处理：将收集的细菌5,000 rpm离心3分钟，弃上清，加入200μLPBS，振荡混匀，5,000 rpm离心3分钟，彻底弃上清。
a) 对于革兰氏阴性菌和一般的革兰氏阳性菌，加入200μL裂解液Ⅰ，悬浮沉淀，37℃放置30分钟。
b) 对于细菌壁较厚的革兰氏阳性菌、真菌、细菌芽孢等须首先自行进行破壁处理，处理结束后进行步骤5操作。
加入200 μL 裂解液Ⅱ，20μL消化液，充分振荡混匀，56℃水浴10 分钟。
加入600μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。
将吸附柱放入收集管内，取上述溶液600μL转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
将剩余400μL液体转入上述吸附柱内，重复操作步骤7。
将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。
取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入50-200 μL 洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2分钟，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存