Question

如何提取细胞线粒体

Answer 1

提取新鲜心肌组织细胞内线粒体的方案：
心肌组织切碎后在4
℃介质（0.25
mol/L蔗糖、10
mmol/L
Tris-HCl
pH7.4，0-4℃）中制备心肌组织匀浆。匀浆经750g、离心10
min后留上清，以9000
g离心20
min
后留沉淀，重新悬浮后以9000
g再离心20
min，弃上清得线粒体.全部操作于4
℃进行。
培养细胞提取线粒体.细胞弃去培养液后，用细胞收集液作用2到3
min，用scraper,将细胞收集起来，6000
g离心15
min。弃上清，之后加细胞匀浆液，用匀浆器或手动匀浆管匀浆，将装有匀浆液的离心管配平后放入普通离心机，以2500
rpm，离心15
min,缓缓取上清液，移入高速离心管中，保存于有冰块的烧杯中.以17000
rpm离心20
min，弃上清，留取沉淀物。加入0．25mol/L蔗糖与0．003
mol/L氯化钙液l
ml，用吸管吹打成悬液，以17000
rpm离心20
min，将上清吸入另一试管中，留取沉淀物，加入0.1ml
0．25mol/L蔗糖与0.003mol/L氯化钙溶液混匀成悬液.即得线粒体。