Question

做荧光定量PCR和半定量PCR有什么区别?半定量的PCR退火温度和荧光定量PCR是一样的吗?

Answer 1

荧光定量PCR和半定量RT-PCR都可以用来检测基因的表达量的,但二者检测的东西多少有些不同.荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入可以和双链DNA特异性结合的荧光染料（sybr green）或者和目的DNA片段结合的荧光探针（taqman),通过监控PCR过程中的荧光的变化,并且和某些管家基乱汪衡因的荧光变化进行对比反应出目标基因的表达量.荧光定量PCR的主要有效数据是荧光信号增长到最大值的一半时的时间.半定量RT-PCR则是通过RT-PCR最终产物电泳后电泳条带的明暗来间接反应出原始模板的丰度.荧光定量PCR因为是全程监控PCR扩增的变化,并且能够同管家基因的扩增曲线进行相对定量,而将基因的表达量数值化,准确度高于半定量RT-PCR.半定量RT-PCR因为是监控的最终产物,而在基因表达水平很高的时候,PCR体系很可能在反应中后期就饱和了,所以对于高水平表达的基因来说,用半定量RT-PCR并不能很准确的说明问题.但是如果要发表比较高档次的陵饥论文的话,某些变态的老外审稿并不认可单一的荧光定量PCR的结果,他们会同时需要作者做一个半定量RT-PCR来作为辅助证明.
半定量RT-PCR的引物和荧光定量PCR的引物设计原则并不是一样的,换而言之,二者的引物并不是可以通用的.所以退火温度自然是不同的,具体怎么不同,要根据哗做实际用到的引物去算.