Question

淀粉酶活力测定

Answer 1

淀粉酶活力测定具体步骤如下：

一、材料、仪器设备及试剂

1、材料：萌发的小麦种子（芽长约1cm）。

2、仪器设备：分光光度计；离心机；恒温水浴；具塞刻度试管；刻度吸管；容量瓶。

3、试剂（均为分析纯）

标准麦芽糖溶液；3.5-二硝基水杨酸试剂；01mol/LpH5.6的柠檬酸缓冲液和1％淀粉溶液。

二、实验步骤

1、麦芽糖标准曲线的制作：取7支干净的具塞刻度试管，编号，按表加入试剂。摇匀，置沸水浴中煮沸5min。取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20ml。以1号管作为空白调零点，在540nm波长下比色测定。以麦芽糖含量为横座标，吸光度值为纵座标，绘制标准曲线。

2、酶液制备：称取1g萌发3天的小麦种子，置于研钵中，加少量石英砂和2ml蒸馏水，研磨成匀浆。将匀浆倒入离心管中，用6ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管。

提取液在室温下放置提取15～20min，每隔数min搅动1次，使其充分提取。然后在3000rpm下离心10min，将上清液倒入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液。

吸取上述淀粉酶原液10ml，放入50ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶稀释液。

3、酶活力的测定：取6支干净的具塞刻度试管，编号，按表进行操作。

4、结果计算：淀粉酶活力=C×VT/(W×Vs×T)(mg/g/min)。