Question

何谓cDNA基因文库?利用cDNA基因文库钓取目的基因有何优越性?

Answer 1

【答案】：cDNA基因文库是指在逆转录酶作用下，以mRNA为模板形成它的互补DNA(complementary DNA，简称cDNA)单链，然后进一步形成双链DNA。将这种双链DNA同适宜的载体(例如质粒)连接成为重组DNA。导入受体细胞(例如细菌)并进行克隆，就成为cDNA基因文库。由于构建cDNA基因文库时，采用的是总mRNA，所以该基因文库拥有同各种mRNA分子相应的DNA克隆。
cDNA基因文库具有多种优越性：(1)对它的筛选比较简单易行。这是因为一个完全的cDNA基因文库比一个完全的基因组文库所包含的克隆种类要少得多，两者相差10～100倍。同时cDNA基因文库来源于mRNA，而mRNA具有特异性表达的时期和部位，恰当地选择mRNA的来源就有可能使所构建的cDNA基因文库中，某一特定序列的克隆达到很高的比例。(2)cDNA基因文库可以用于克隆在细菌中表达的基因。因为cDNA克隆已经删去了内含子，而至少目前认为，原核生物并不具备从原始转录产物上删除内含子的酶分子。(3)cDNA基因文库可用于测定基因DNA序列的结构。由于cDNA克隆来自成熟的mRNA，所以测定cDNA克隆的序列就能够分析基因外显子的碱基排列顺序。再通过同已知的基因组中基因DNA序列的比较，还可以确定内含子与外显子的界限。