Question

DNA重组技术中，获得目的基因的方法都有那些？

Answer 1

【答案】：目的基因的获得目前普遍采取3种方法：
(1)以mRNA为模板，用反转录酶合成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增DNA。这里，关键是要预先获得目的基因的mRNA，mRNA极易降解，所以提取过程中要防止内源和外源RNase对其降解。
(2)人工合成基因：现在使用计算机控制的DNA合成仪可以合成一定长度的DNA片段。只要已知某基因的序列，即可输入编码顺序由DNA合成仪合成此序列。
(3)构建基因文库：将编码生物细胞染色体DNA分子的全部基因，尽量完整地提取出来，用某些限制性内切酶处理，使DNA成为一定长度的片段并分别与载体(一般为λ噬菌体)连接，侵染大肠杆菌。这样，这些被侵染的大肠杆菌细胞里分别含有总DNA中的各种基因片段，只要选用与所需基因互补的DNA片段作探针，通过原位杂交、Southern 杂交等即可从大肠杆菌中筛选出所需要的目的基因。通常把这些含有总DNA中各种基因片段的所有大肠杆菌细胞称为基因文库。