试述原核表达体系和真核表达体系各自的优、缺点。
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【答案】:原核表达体系如E.coli是当前采用最多的原核表达体系,其优点是培养方法简单、迅速、经济而又适合大规模生产工艺。其不足之处是由于缺乏转录后加工机制,只能表达克隆的cDNA,不宜表达真核基因组DNA(即含有内含子的DNA);表达的真核蛋白质不能形成适当的折叠或进行糖基化修饰;表达的蛋白质常常形成不溶性的包涵体,欲使其具有活性尚需进行复杂的复性处理;很难在E.coli表达体系表达大量的可溶性蛋白。
真核表达体系如酵母、昆虫及哺乳类动物细胞表达体系,尤其是哺乳类动物细胞表达体系,不仅可表达克隆的cDNA,而且还可表达真核基因组DNA;哺乳类细胞表达的蛋白质通常总是被适当修饰,因此表达产物直接就有功能。但操作技术难、费时、不经济是哺乳类动物细胞表达体系的缺点。
真核表达体系如酵母、昆虫及哺乳类动物细胞表达体系,尤其是哺乳类动物细胞表达体系,不仅可表达克隆的cDNA,而且还可表达真核基因组DNA;哺乳类细胞表达的蛋白质通常总是被适当修饰,因此表达产物直接就有功能。但操作技术难、费时、不经济是哺乳类动物细胞表达体系的缺点。
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