Question

如何用已有的cDNA，做出相应的蛋白质？请写出详细的操作步骤，谢谢

Answer 1

可以利用基因工程技术进行蛋白质表达。
一个完整的基因克隆过程可以用分、切、接、转、筛五字概括。
分：即分离出感兴趣的外源基因----目的基因，其来源途径有：PCR技术，化学合成法，酶促合成cDNA，制备的基因组DNA。其中最常用的是PCR技术。
由于外源DNA片段离开染色体是不能复制的，就需要将外源DNA连到复制子上，外源DNA则可作为复制子的一部分在受体DNA中复制。这种复制子即基因载体。
载体（vector）是指能够携带外源基因进入宿主细胞的DNA分子。载体应具备以下条件：1.带有复制子（DNA聚合酶识别位点）能在宿主细胞内携带外源基因一同进行复制。2.载体分子上应具有单一限制酶切位点，以供外源基因的插入，一般将几个单一限制性酶切位点构建在载体的一个部位构成多克隆酶切位点（Multiple Cloning Site,MCS）。3.具有筛选标志，即载体分子上能赋予受体细胞一定特性的特定基因顺序，例如抗药基因，编码酶的基因等，用于筛选含此载体的受体细胞。4.对于表达型载体还应具备能使外源基因表达的完整的转录单位。
载体按功能分类可分为克隆载体和表达性载体。前者以复制外源基因为目的，后者即能复制外源基因又能表达外源基因产物。按载体来源分类可以分为质粒载体，噬菌体DNA，病毒DNA，酵母人工染色体等，质粒是最常用的载体。
质粒（plasmid）是存在与于细菌染色体外的能独立复制的双链闭环的DNA分子，能赋予细菌某些特性的辅助遗传单位。其性质：1.根据质粒在一个细胞周期内产生拷贝的数量，可将质粒分为严谨型（低拷贝，复制1—2次）和松弛型（高拷贝，复制10—200次）。2.不相容性：是指同一类的不同个体质粒不能在同一个细菌中稳定共存，细菌经分裂后，细菌中只留下拷贝数较高的质粒，例如R1和R2两种抗药性质粒同属于一类，因此不能共同存在于同一细菌中。但不同类群的质粒可以在一个细菌中共存。常用的质粒有pBR322，pUC18/19等。