western blot原理
Western blot原理如下：
Western blot是一种常用的蛋白质分析技术，通过将目标蛋白从复杂的混合物中分离并定量检测，以确定蛋白质的存在与表达水平。Western blot技术包括样品制备、蛋白质分离、转移到膜上、蛋白质检测和分析等步骤。
一、样品制备与蛋白质分离
首先，需要从细胞或组织中提取目标蛋白，通常使用细胞裂解和蛋白质抽提试剂盒来破坏细胞膜并释放蛋白质。然后，通过离心等步骤将提取的样品进行纯化和富集，以消除杂质和其他蛋白质的干扰。
二、SDS-PAGE胶电泳
将样品中的蛋白质根据分子量大小进行分离是Western blot的关键步骤。通常使用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）来实现这一目的。在SDS-PAGE中，通过将蛋白质样品经过电泳使其在凝胶中迁移，根据分子量不同而分离成不同的条带。
三、转印至膜上
在SDS-PAGE分离完成后，蛋白质需要从凝胶上转移到膜上，以便后续的免疫检测。这一步骤称为电泳转印（electrotransfer），通常使用半干炉或湿式转印系统。
通过在蛋白质上施加电流，将蛋白质从凝胶中转移到膜上。常用的转印膜包括聚偏氟乙烯（PVDF）膜和硝酸纤维素膜。
四、蛋白质检测和分析
在蛋白质转移至膜上后，需要进行蛋白质检测和分析。第一步是阻断，即使用蛋白质结合抑制剂将膜上的非特异性结合位点阻断，避免免疫检测的背景干扰。第二步是免疫检测，将特异性抗体与目标蛋白结合，并使用标记的二抗或酶标记的抗体进行检测。
五、结果分析和数据获取
通过Western blot可以获得蛋白质的存在和表达水平的信息。这可以通过观察免疫检测结果中的蛋白质带来判断。使用成像系统（如化学发光系统或紫外线成像系统）获取图像，并利用图像分析软件进行定量分析。
研载生物科技（上海）有限公司_
2023-04-12 广告
Western blot(也称为蛋白质免疫印迹)是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。
它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质,然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上,接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中,未结合的抗体被洗掉,只留下与目标蛋白质结合的抗体,最后通过显影胶片或荧光扫描来检测结合的抗体。
相关如下：
原理：先制备蛋白质样品，再利用SDS-PAGE原理，分离不同的蛋白质，再将分离的蛋白质进行转膜，以便固定在新膜上进行抗原-抗体结合。用固定在膜上的蛋白质作为抗原与对应的非标记抗体（一抗）结合。
由于此过程中，可能有未结合到抗原的抗体遗留，故需要清洗，以便保存特异性结合的抗原-抗体结合物。抗原抗体结合物暴露出一个Fc片段，相应的二抗可以结合到这个片段上，形成抗原-一抗-二抗结合物。
再用相应的过氧化物酶或碱性磷酸酯酶标记到二抗上，由于加入的标记物相对质量分子很大，可以用离心作用将其沉淀下来，如果抗原与抗体结合，便可以一起沉淀下来，最后通过显色反应或放射自显影法便可检测凝胶中的蛋白成分了。
