Question

PCR的引物怎样连接？

Answer 1

PCR反应中是从引物的3‘端开始合成新DNA链的。所以新合成的DNA链中，原来的引物在5‘端，新加入的碱基在3‘端。

引物3’端为关键碱基，是PCR延伸的起始端，不能进行任何修饰，也不能形成二级结构的可能，一般3‘端也不能发生错配，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

5’端无严格限制，只起限定PCR产物长度的作用，对扩增特异性影响不大，因此常用来引进修饰位点或标记物。

扩展资料：

PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

参考资料来源：百度百科-聚合酶链式反应

Answer 2

在退火过程中，引物与单链DNA按碱基互补配对原则结合，碱基与碱基之间是靠氢键连接，即一条链上的A，会与另一条长链上的T形成氢键，而G是与C形成氢键。 即A=T、G≡C，AT是双氢键，GC是三氢键 。