作为基因工程载体,其应具备哪些条件
1、在宿主细胞中能保存下来并能大量复制,且对受体细胞无害,不影响受体细胞正常的生命活动。
2、有一定的标记基因,便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因,就可以作为筛选的标记基因。一般来说,天然运载体往往不能满足上述要求,因此需要根据不同的目的和需要,对运载体进行人工改建。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。
3、含有复制起始位点,能够独立复制;通过复制进行基因扩增,否则可能会使重组DNA丢失。
4、有多个限制酶切点,而且每种酶的切点最好只有一个,如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点,可适于多种限制酶切割的DNA插入。
5、载体DNA分子大小应合适,以便操作。
扩展资料:
分类:
1、病毒载体,质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖,不能满足真核DNA重组需要。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多,因而病毒载体构建时一般都把细菌质粒复制起始序列放置其中。使载体及其携带的外来序列能方便地在细菌中繁殖和克隆,然后再引入真核细胞。
2、噬菌体载体,利用噬菌体作载体,主要是将外来目的DNA替代或插入中段序列,使其随左右臂一起包装成噬菌体,去感染大肠杆菌,并随噬菌体的溶菌繁殖而繁殖。
3、质粒载体,质粒载体是一种相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(一般有1~200 kb左右,kb为千碱基对),有的一个细菌中有一个,有的一个细菌中有多个。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移,可以独立复制,也可整合到细菌染色体DNA中,随着染色体DNA的复制而复制。
参考资料来源:百度百科-载体
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①必须有一个或多个限制酶的切割位点,以便目的基因可以插入到载体上
②载体必须具备自我复制的能力,或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制
③必须带有标记基因,以便进行重组后的筛选
④必须是安全的,不会对受体细胞有害,或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去
⑤大小应合适,太大则不易操作
基因操作中要获取目的基因必须有一个或多个限制酶的切割位点,以便目的基因可以插入到载体上;载体必须具备自我复制的能力,或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制;必须带有标记基因,以便进行重组后的筛选;必须是安全的;大小应合适,太大则不易操作。
第一、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存;
第二,具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接;
第三,具有标记基因,以便于进行筛选。