Question

为什么SDS-PAGE电泳时样品液再加样前要在沸水中加热?

Answer 1

使样品充分变性，伸展，与SDS充分结合，成为雪茄状，这样分子量才能用marker计算，因为marker都是充分变性的。

溴酚蓝在胶中的电泳速度较快，相当于一个很小的蛋白分子，标记你的样品在胶中的电泳距离。

蛋白质电泳前，需用样品缓冲液处理，样品缓冲液中除SDS外，还有还原剂β-巯基乙醇，它可将蛋白质分子中的S-S（二硫键）还原。电泳样品制备时加热，就是为了加速这些组分与蛋白质的反应。

扩展资料：

蛋白质离子进入分离胶后，条件有很大变化。由于其pH升高(电泳进行时常超过9．0)，使Gly解离成负离子的效应增加；同时因凝胶的浓度升高，蛋白质的泳动受到影响，迁移率急剧下降。此两项变化，使Gly的移动超过蛋白质，上述的高电压梯度不复存在，蛋白质便在一个较均一的pH和电压梯度环境中，按其分子的大小移动。

分离胶的孔径有一定的大小，对不同相对分子质量的蛋白质来说，通过时受到的阻滞程度不同，即使净电荷相等的颗粒，也会由于这种分子筛的效应，把不同大小的蛋白质相互分开。

参考资料来源：百度百科-SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

Answer 2

沸水加热样品液在SDS-PAGE电泳中的目的是多重的：
1、蛋白质变性
在沸水中加热可以帮助蛋白质变性，使其失去其原有的三维结构，变成线性的结构。在SDS-PAGE电泳中，我们希望蛋白质以其线性结构通过凝胶，这样它们的迁移速度主要由它们的大小决定。
2、与SDS结合
SDS是一种阴离子性表面活性剂。加热可以帮助SDS与蛋白质更好地结合，使蛋白质带有负电荷。这样，蛋白质在电泳中可以向阳极迁移。
3、打破二硫键
如果样品液中含有还原剂（如2-巯基乙醇或DTT），加热可以帮助打破蛋白质内部的二硫键。这样可以进一步确保蛋白质处于线性状态，从而确保电泳结果的准确性。