Question

琼脂糖凝胶电泳 质粒dna回收后验证出现杂带怎么回事？在线等

已经失败了好几次了，都是验证时在目的前面出现不是太明显得杂带，重新p过跑胶，还是一样，这是什么原因？是操作问题还是试剂被污染？可是师姐的和我们一起跑（同一板胶），可是师姐的却验证成功啊，快要把我弄崩溃了，就是找不到原因。跪求大神分析

Answer 1

出现杂带，一半要考虑做对照，了解杂带的来源。

1. 阴性对照，不加模板，看是否有条带，如果有，则反应体系污染。

2. 质粒对照，有些时候质粒本身带有的片段可能造成非特异扩增，所以放一个质粒空载体（只有载体，不带片段）做模板的质粒对照，如果这个能扩出来杂带，没有目标片段，基本就可以判断是由于载体的背景带来的杂带，可以尝试优化下条件，如果想要单一条带，可能需要重新合成引物。也可以直接去测序，看目标片段是否正确。

3. 阳性对照，能够扩增出单一目标片段的样品最为模板，以检测反应体系是否成功。如果阳性对照也有杂带，则说明应该是在最开始扩增的时候，克隆之前就有杂带了，需要重新做一下。或者再把之前的单克隆划线，重新分单克隆纯化再做。
   

当然，因为你给出的信息也很有限，只能先从这几个方面去考虑下。找找问题在哪。