Question

16SrRNA鉴定菌株的方法！求详细步骤！

Answer 1

我觉得不应该越详细越好，应该给你大体步骤，然后细节你自己找，查阅文献也是一种能力的培养，而且这种文献到处都是
一、提取其DNA，利用16SrRNA通用引物PCR扩增出其16SrRNA，取出一半进行跑胶测试纯度与大小，一般是1500bp左右，以下称之为目的基因
二、如果第一步得到的目的基因理想，就将目的基因连接到T载体上，T载体有很多种，随便哪种都可以，如果一种连接不上就换另一种，应该注意记得所用T载体的分子量大小，一般3000bp左右
三、连接后将整个连接体导入大肠杆菌细胞感受态细胞（很多实验书上都有具体步骤）
四、培养感受态细胞16或18小时，提取其质粒，然后将质粒拿出一部分跑胶，看提取情况并看一下分子量是否为16SrRNA和T载体的分子量之和，如果是，则成功
五、酶切所提取的质粒，以得到目的基因，跑胶，如果有目的基因大小的明亮条带则说明是16SrRNA，拿去测序就可以了