Question

做bca时可以先加工作液再加样本吗

Answer 1

1. 根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液,充分混匀.BCA工作液室温24小时内稳定.2.完全溶解蛋白标准品,取10微升稀释至100微升 ,使终浓度为0.5mg/ml.蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释.但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品.3.将标准品按0,1,2,4,8,12,16,20微升加到96孔板的标准品孔中,加标准品稀释液补足到20微升.4.加适当体积样品到96孔板的样品空中,加标准品稀释液到20微升.5.各孔加入200微升BCA工作液,37℃放置30分钟.注：也可以在室温放置2小时,或60℃放置30分钟.BCA法测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深.并且显色反应会因温度升高而加快.如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或延长孵育时间.6.测定A562,540-595nm之间的波长也可接受.根据标准曲线计算出蛋白浓度.

2. 事先配好各个浓度的bsa标准品,step 1 A液和B液按 50：1混合,（比如你要测2个样品,可以是6个标准曲线点 0,0.05,0.1,0.2,0.5,1mg/ml,加上2个样品,也就是8个孔,做平行就是16孔,那么取A液取16*0.2=3.2ml,B液取64ul 混合就ok了） step2 每孔加200ul混合液,然后标准曲线孔加入25ul标准品 ,样品稀释到合适的比例,也加入25ul（如果图省事的话,比如也1ul样品,再加24ul水补齐,加样的时候可能不会太准） step3 37度孵育30min step4 测 od 565,附近也行