Question

TRIzol法提取流感病毒RNA每个步骤详细注意事项？

本人刚开始做 做了两三次 都跑不出RNA条带 很是揪心 希望能解答下 每个步骤 的详细注意事项以及作的经验 写得越详细加分越多 ~~多谢帮助~~

Answer 1

三、Trizol法提取法（这是提禽流感病毒的步骤，供参考）

Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。

1、取鸡胚尿囊液，加入5-10倍体积Trizol液，混匀；

2、室温放置5分钟，然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒；

3、取上层水相于一新的离心管，按每ml Trizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇，室温放置10分钟，12000g离心10分钟；

4、弃去上清液，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，混匀，4℃下7500g离心5分钟；

5、重复第4步；

6、小心弃去上清液，然后室温干燥5-10分钟，注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度；

7、然后将RNA溶于水中，放置10分钟。

[注意]

1、整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作，低温可以避免脆弱的RNA被降解；

2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。