Question

副溶血性弧菌的检验程序，跟其他致病菌检验的主要区别有哪些

Answer 1

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种重要的食源性致病菌,人们食用受该菌污染的食物后会引起腹泻、呕吐等症状,甚至导致脱水、休克及死亡。目前,副溶血弧菌引起食物中毒的发生规模呈明显扩大趋势,已成为我国首要的食源性致病菌。因此,对副溶血弧菌进行常规调查,了解其分布、形态和类型以及发展新型副溶血弧菌检测方法就显得尤为重要。当前,虽然国内外已有采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测副溶血性弧菌的相关报道,但是仍存在成本高、耗时长、不稳定和易污染等不足,因此迫切需要一种新型的检测副溶血弧菌的方法。 目的:了解市售水产品中副溶血弧菌污染情况并建立简便、快速和灵敏的新型LAMP检测副溶血弧菌基因tlh、tdh和trh的方法。 方法:一、在食物中毒高发季节采集鱼、虾、贝、蟹及头足5类20种共161份样本,然后按照传统培养法和生理生化法进行副溶血弧菌分离和鉴定,之后采用普通PCR法检测副溶血弧菌的tlh基因进行验证,并对其毒力基因(tdh和trh)进行检测和分布统计分析,最后采用11种O群分群血清对分离到并验证的副溶血弧菌进行血清分群研究。二、针对副溶血弧菌种特异性基因-不耐热溶血毒素基因(tlh)的6个特异性位点设计1套LAMP引物,通过对反应体系(镁离子浓度、甜菜碱浓度、内外引物比及环引物加入与否)及反应条件(反应温度和反应时间)的优化建立副溶血弧菌的LAMP检测法,之后通过采用LAMP法检测74株实验菌评价其特异性,通过采用LAMP法检测梯度稀释的标准菌基因组DNA、纯培养的副溶血弧菌及贝类模拟样本评价其检测敏感性,并与普通PCR法检测敏感性对比分析评价其应用价值。三、针对副溶血弧菌种特异性基因-溶血毒素基因(tdh及trh)的6个特异性位点分别设计1套LAMP引物,采用新建的LAMP法体系和条件对74株食源性病原菌分别进行tdh和tlh基因的LAMP检测,观察其检测特异性并评价该方法的现场应用价值。 结果:一、通过传统方法分离和鉴定及PCR验证,161份样本中共检出副溶血弧菌45株,平均检出率为27.95%,不同种类水产品中V p的检出率有显著性差异(χ2= 11.20, 0.01