Question

月季的组织培养法是怎样的？

Answer 1

用组织培养的方式进行繁殖，其繁殖率远远高于其他无性繁殖的手段，所得的新苗不仅可以保留原品种的优良性状，而且能得到无病毒感染的植株。所用的时间比播种苗、扦插或嫁接苗均短，在良好的条件下，经过2个月的组织培养苗，春季下地栽种当年即可见花。

月季的组织培养繁殖在国内外已有不少报道，目前这一快速繁殖方法已基本完善，在一些地方已经用于工业化生产，对加速老品种更新换代，迅速普及名优品种起到了很大作用。在培养程序上基本相同如图4，但在不同条件下，可以有一定程度的灵活性。

图4 月季组织培养流程图

1.培养基的配制

在开始组织培养时，首先要配制培养基。目前最常用的月季培养基是MS培养基，其配方列于表4。

表4 MS培养基配方

MS培养基母液的配制：为了更方便地配制培养基，要先配制比所需浓度高10～100倍的母液如表5，并用家用冰箱在0℃左右贮存备用。母液要按无机成分分别配制，以免发生化学反应或沉淀。

表5 MS培养基母液的配制

MS培养基的配制：先在洁净的不锈钢锅里放入约750毫升蒸馏水，加入所需要的琼脂和糖，最好先在水浴锅里将琼脂溶化，如果直接加热，应不停地搅拌，防止锅底烧焦或沸腾溢出。然后加入表5中的母液Ⅰ50毫升，母液Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各5毫升，加蒸馏水将体积调到1升。充分混合好后，用氢氧化钾或氢氧化钠将溶液pH调到5.8左右。至此培养基的配置已算完成。

分装消毒：将培养基分别注入试管或三角瓶内，深度为全深的1/3或1/4即可。然后加盖或用棉塞塞紧。将试管或三角瓶平摆在高压锅内，在压力202.65千帕（2个大气压），温度120℃下灭菌15～20分钟即可。灭菌后取出放至室温即可使用。做好的培养基一般应在2周内用完，短时间可存放于室温条件，如不能尽快用完，应存放于4℃条件下，如果培养基表面变干，就不能再用。

2.无菌培养的建立

（1）植物组织材料选取与消毒

首先从生长在田间的或盆栽的优良品种植株上，选取生长健壮的当年枝条，采回后切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗手刷蘸浓洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲净，毛巾擦干，置小木板上，用利刀切成2～3厘米一段，每段至少有一个侧芽。然后在超净工作台或接种箱内，用饱和漂白粉上清液，作表面灭菌15～30分钟。然后倾去灭菌溶液，用无菌水刷洗数次（无菌水是用1000毫升的大三角瓶，盛放2/3体积的自来水，经半小时的高压灭菌后放凉即可。无菌水存放时间不宜过长，以1～2周较好，时间长了要重新高压灭菌）。

（2）接种与培养

接种就是把植物材料插入培养基的过程，要注意严格执行无菌操作。将洗涤好的月季茎段用无菌纱布吸干外表水分，用灼烧过的镊子夹一块茎段送入装有培养基的管内，轻轻插在培养基上，再塞上高压灭菌过的棉塞。将接种好的试管放在培养室内培养，温度以21℃左右较好，光照10～12小时，光强800～1200勒克斯，从芽萌发到长到1厘米左右约需2～3周。

（3）继代增殖培养

将上面已经长大的月季嫩茎切成1～2节一段，投入新鲜的增殖培养基上。增殖培养基可直接用MS培养基，也可在MS培养基中加入细胞分裂素BA和吲哚乙酸IAA。用量是每升培养基加1～2毫克BA，加0.1毫克IAA。月季小苗经5～6周1次的继代增殖，会按几何级数增殖起来。

（4）壮苗培养

继代增殖的小苗嫩茎很细弱，要进行一次壮苗培养，以取得适合生根和以后移栽的苗子。壮苗培养基是在MS培养基中加入细胞分裂素BA0.3～0.5毫克/升，加入吲哚乙酸IAA0.01～0.1毫克/升。将月季嫩茎投入壮苗培养基后，控制光照10～12小时/天，光强800～2000勒克斯，温度21℃左右。

（5）生根与移栽

经过壮苗培养的月季嫩茎长到一定长度时，就应切割下来，转入生根培养基。生根培养基是将MS培养基稀释1倍，再加入吲哚乙酸IAA1.0毫克/升或吲哚丁酸IBA0.5毫克/升，再加入活性炭300毫克/升和白糖30克/升。切下的月季嫩茎长度以2～3厘米为宜。经3周培养，就有数条白根生成，这时就可出瓶移栽。第一次移栽是把幼苗取出，先洗去沾附的琼脂培养基，再种植到蛭石或锯木屑＋园土（1∶1）的介质中，其他类似介质也可视情况选用，但要疏松通气，有一定的保水、保肥能力。种植密度每株2～3厘米×4～6厘米。移栽完毕浇透水，用0.1%百菌清、多菌灵或托布津等喷雾保苗。保持相对湿度85%以上。移栽1周后，可施稀薄的追肥。视苗大小，浓度逐渐由0.1%提高到0.3%左右，施肥种类可用复合肥、尿素、磷酸二氢钾以及饼肥水等等。通常7～10天喷一次杀菌剂保苗。在4～6周后，进行第二次移栽，通常植入5厘米×9厘米的塑料杯或营养钵中，每杯种1苗，加强水、肥和病虫害管理防治，经4～6周，地上地下部分都充分生长，有些植株可能开花，此时可上盆或定植。