Question

引物必须从基因的首端或尾段开始引导吗？

就是在利用PCR技术扩增目的基因时，引物只能在单链的首端或尾端结合，然后单向延伸吗？可不可以在目的基因的中间结合后双向延伸？

Answer 1

不是呢，引物是和基因一条单链的某一部分匹配的一小段核酸，理论上可以是基因的任何部位。但人体内的生理反应都是为了表达一段完整的基因，所以基本从基因的首端开始(这一部分个人觉得只是目前这么认为，因为目前基因的起止点都是根据转录的RNA确定的，所以有可能一段基因不止这么长，人类认为没有意义的基因片段可能也是基因的一部分。)而如果是人工合成的话，引物可以是任何位置，但最终转录出的RNA并不一定具有生理效应

Answer 2

PCR引物必须与目的基因片段的一小段序列互补吗，
PCR引物必须与目的基因片段的一小段序列互补
1，PCR引物是利用碱基互补原则，通过找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。
2，首先要找到你用来设计引物的目的基因全序列，一般NCBI、Genebank上都能找得到。
3，引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导 致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应；引物3’端尽量不要出现3个以上的连续碱基，
如GGG或CCC，这样会会增加错配几率，3’端尽量不要以A为结尾； 引物序列的GC含量一般为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的 GC含量不能相差太大；
ΔG值是指DNA双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳 定性。应当选用3’端ΔG值较低（绝对值不超过9），
而5’端和中间ΔG值相对较高的引物。引物的3’端的ΔG值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA聚合反应；
对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点，应根据下一步实验中要插入PCR产物 的载体的相应序列而确定。