Question

westernblot实验步骤

Answer 1

组织（小鼠十二指肠）蛋白提取 

1. 准备:研磨珠、离心管、生理盐水、RIPA蛋白裂解液、蛋白酶抑制剂，磷酸化蛋白酶抑制剂，移液枪，枪头，手套，冰，涡旋仪，4℃离心机;

   在RIPA蛋白裂解液中加入蛋白酶抑制剂、磷酸化蛋白酶抑制剂（根据说明书确定加入量）
   

2.研磨:提前在离心管中分装300μLRIPA蛋白裂解液并放入2颗研磨珠，称取100mg左右样品，置于匀浆机中充分研磨;

3.   蛋白裂解:将样品置于冰上裂解2h,期间于涡旋振荡器上震荡2-3次;

4.   蛋白收集:将裂解后的样品4℃12000rpm离心10min，取上清置于新的EP管中备用。